محیط کشت نوترینت براث

محیط کشت نوترینت براث (Nutrient Broth)

محیط کشت Nutrient Broth (NB) فرم مایع محیط Nutrient Agar است که فاقد آگار می‌باشد. این محیط یک براث عمومی و غیرانتخابی است که از پپتون (منبع نیتروژن، کربن و ویتامین‌ها) و عصاره گوشت (منبع اسیدهای آمینه و فاکتورهای رشد) تشکیل شده است. این ترکیب ساده، نیازهای اولیه تغذیه‌ای بسیاری از باکتری‌های رایج آزمایشگاهی را برآورده می‌کند. محیط NB به دلیل شفافیت، برای مشاهده آسان رشد باکتری‌ها به صورت کدورت (Turbidity) ایده‌آل است. کشت مایع در این محیط امکان رشد یکنواخت، اختلاط و هوادهی (در صورت شیکر شدن) را فراهم می‌کند که برای تولید زیست‌توده (Biomass) و مطالعات رشد (Growth Curve) بسیار مناسب است. این محیط فاقد هرگونه مهارکننده است و بنابراین برای کشت میکروارگانیسم‌های سخت‌گیر یا بیماری‌زای خاص کافی نیست، اما برای بسیاری از باکتری‌های متداول مانند E. coli، Bacillus subtilis و Staphylococcus aureus محیطی ایده‌آل محسوب می‌شود.

کاربرد اصلی آن در آزمایشگاه‌های آموزشی، تحقیقات پایه، کنترل کیفیت و نیز به عنوان محیط پیش‌کشت (Pre-culture) برای تهیه اینوکولوم اولیه جهت تلقیح محیط‌های تخصصی‌تر یا انجام تست‌های بیوشیمیایی است.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث)، پایه و عمومی برای کشت غیرانتخابی در فاز مایع
• هدف کشت: کشت و تکثیر عمومی باکتری‌های غیرسخت‌گیر در شرایط مایع؛ تهیه کشت اولیه (Inoculum)
• حالت فیزیکی: پودر (حاوی پپتون، عصاره گوشت و کلرید سدیم) که پس از حل کردن در آب مقطر و اتوکلاو، در لوله یا فلاسک توزیع می‌شود.
• ترکیبات کلیدی: پپتون، عصاره گوشت (Beef Extract)، کلرید سدیم (NaCl)
• ویژگی کلیدی: سادگی و شفافیت؛ امکان مشاهده آسان کدورت ناشی از رشد و تهیه کشت مایع همگن.
• شرایط کشت: معمولاً در لوله‌های تست (برای کشت ایستا) یا در فلاسک‌های ارلن‌مایر (برای کشت شیک‌شده) استفاده می‌شود. تلقیح با یک کلنی یا کشت مایع قبلی انجام می‌گیرد.
• شرایط انکوباسیون: معمولاً ۳۵-۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۸-۲۴ ساعت برای کشت معمولی. برای کشت شیک‌شده، سرعت ۱۵۰-۲۰۰ RPM توصیه می‌شود.
• خوانش نتیجه: رشد باکتری به صورت ایجاد کدورت (Turbidity) یکنواخت در محیط مشاهده می‌شود. شدت کدورت را می‌توان به صورت چشمی یا با اندازه‌گیری جذب نوری (OD) در طول موج ۶۰۰ نانومتر سنجید.
• کنترل کیفیت: سویه Escherichia coli ATCC 25922: ایجاد کدورت واضح پس از ۱۸-۲۴ ساعت انکوباسیون. سویه Staphylococcus aureus ATCC 25923: ایجاد کدورت خوب. سویه Bacillus subtilis ATCC 6633: رشد خوب، گاهی با تشکیل پلت در کف (در صورت عدم شیکر).
• کاربرد اصلی: محیط پایه مایع برای رشد عمومی باکتری‌ها، تهیه کشت اولیه برای تست‌ها، مطالعات رشد و تولید زیست‌توده در مقیاس آزمایشگاهی.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر محیط Nutrient Broth ایبرسکو (IBRESco) را در جای خشک و خنک نگهداری کنید. برای تهیه، پودر را در آب مقطر حل کرده و کاملاً هم بزنید تا محلول شفاف شود. سپس طبق دستور اتوکلاو نمایید. محیط‌های آماده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد نگهداری کرد و قبل از استفاده باید به دمای اتاق رسانده شوند. برای کشت‌های هوازی در فلاسک، حجم محیط نباید بیش از ۲۰٪ حجم فلاسک باشد تا هوادهی کافی صورت گیرد. استفاده از درب‌های سست (مثلاً پنبه یا درب‌های تنفس‌دار) برای تبادل گاز ضروری است. تلقیح اولیه معمولاً با یک کلنی منفرد یا ۱-۲ درصد حجمی از یک کشت مایع فعال انجام می‌شود. برای جلوگیری از آلودگی، تمام مراحل تحت شرایط آسپتیک انجام شود. در صورت نیاز به نگهداری کشت برای مدت طولانی‌تر، می‌توان از محیط Nutrient Agar روی شیب استفاده کرد. NB برای کشت باکتری‌های بیهوازی اجباری مناسب نیست (مگر در شرایط بیهوازی و عدم وجود اکسیژن). این محیط پایه مناسبی برای افزودن مواد دیگر (مانند قندها برای تست تخمیر یا خون برای غنی‌سازی) به منظور اهداف خاص است. پس از رشد، سلول‌ها را می‌توان با سانتریفیوژ جدا کرده و ابرناتانت را دور ریخت یا برای آنالیزهای بعدی نگهداری کرد.