محیط کشت هلیکوباکتر پیلوری سلکتیو مدیوم بیس 1

محیط کشت پایه انتخابی هلیکوباکتر پیلوری (Helicobacter Pylori Selective Medium Base)

محیط کشت Helicobacter Pylori Selective Medium Base یک محیط پیچیده بر پایه عصاره مخمر، پروتئوز پپتون و عصاره گوشت است که نیازهای تغذیه‌ای دقیق باکتری کندرشد و میکروآئروفیل H. pylori را برآورده می‌سازد. این محیط پایه حاوی شارکول (ذغال فعال) است که به جذب مهارکننده‌های بالقوه موجود در نمونه کمک کرده و ممکن است به عنوان منبعی از فاکتورهای رشد نیز عمل کند. همچنین حاوی آگار برای ایجاد قوام جامد است. با این حال، این محیط پایه فاقد دو جزء حیاتی برای کشت موفق H. pylori است: ۱) خون (معمولاً خون اسب یا گوسفند به میزان ۵-۱۰٪) که منبع ضروری فاکتورهای رشد، چربی‌ها و پروتئین‌ها است. ۲) یک کوکتل آنتی‌بیوتیکی بسیار انتخابی (معمولاً شامل پولیمیکسین B، تری متوپریم، وانکومایسین و آمفوتریسین B یا نالیدیکسیک اسید) که به طور مؤثر آلودگی‌های باکتریایی و قارچی سریع‌رشد نمونه بیوپسی را مهار می‌کند و به H. pylori فرصت رشد می‌دهد. پس از افزودن این اجزا، محیط در شرایط میکروآئروفیلیک (۵-۱۰٪ O₂، ۵-۱۰٪ CO₂، ۸۰-۹۰٪ N₂) انکوبه می‌شود.

کاربرد اصلی این محیط در آزمایشگاه‌های میکروبیولوژی تشخیصی بالینی برای جداسازی مستقیم و کشت H. pylori از نمونه بیوپسی اندوسکوپی معده به منظور تشخیص عفونت، تست حساسیت آنتی‌بیوتیکی و مطالعات اپیدمیولوژیک است.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: پایه جامد (آگار) غنی‌شده برای تهیه محیط انتخابی هلیکوباکتر پیلوری
• هدف کشت: جداسازی و کشت انتخابی Helicobacter pylori از نمونه‌های بیوپسی معده
• حالت فیزیکی: پودر (حاوی ذغال فعال، تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده تا حل شود، اتوکلاو و سپس پس از سرد شدن، خون و آنتی‌بیوتیک اضافه می‌شود). محیط پایه خاکستری تیره (به دلیل ذغال) است.
• ترکیبات کلیدی پایه: عصاره مخمر، پروتئوز پپتون، عصاره گوشت، شارکول (ذغال فعال)، آگار.
• افزودنی‌های ضروری برای محیط کامل: خون استریل (اسب یا گوسفند، ۵-۱۰٪) و مکمل آنتی‌بیوتیکی انتخابی اختصاصی هلیکوباکتر (معمولاً حاوی پولیمیکسین B، تری متوپریم، وانکومایسین، آمفوتریسین B).
• شرایط کشت: نمونه بیوپسی به صورت مستقیم روی سطح محیط کشت داده شده و به صورت استریک پخش می‌شود.
• شرایط انکوباسیون: دمای ۳۷ درجه سانتی‌گراد تحت اتمسفر میکروآئروفیلیک (با استفاده از ژار و کیسه‌های گاز یا انکوباتور CO₂ با شرایط کنترل شده اکسیژن) به مدت ۳ تا ۷ روز، گاهی تا ۱۴ روز.
• خوانش نتیجه: مثبت: تشکیل کلنی‌های کوچک (۱-۲ میلی‌متر)، شفاف تا خاکستری، محدب و براق پس از ۳-۵ روز. کلنی‌ها ممکن است کمی همولیز ایجاد کنند. منفی: عدم رشد پس از ۱۰-۱۴ روز.
• کنترل کیفیت: رشد خوب و تشکیل کلنی‌های مشخص با سویه مرجع Helicobacter pylori ATCC 43504. مهار آلودگی‌های رایج با آنتی‌بیوتیک‌های انتخابی.
• کاربرد اصلی: روش استاندارد طلایی برای کشت و جداسازی H. pylori از نمونه‌های بالینی جهت تشخیص قطعی، تعیین حساسیت آنتی‌بیوتیکی و مطالعات تایپینگ.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر پایه Helicobacter Pylori Selective Medium Base باید در جای خشک نگهداری شود. پس از اتوکلاو محیط پایه حاوی ذغال، آن را تا ۵۰-۵۵ درجه سانتی‌گراد سرد کنید. سپس خون استریل و محلول استریل آنتی‌بیوتیک انتخابی را در شرایط آسپتیک اضافه کرده و به آرامی مخلوط کنید (از ایجاد کف خودداری کنید). بلافاصله در پلیت بریزید. ایجاد و حفظ شرایط میکروآئروفیلیک در طول انکوباسیون برای موفقیت کشت حیاتی است. نمونه بیوپسی باید بلافاصله پس از جمع‌آوری یا در محیط انتقالی ویژه به آزمایشگاه منتقل و کشت شود. کلنی‌های مشکوک باید با تست‌های تأییدی (اکسیداز، کاتالاز، اوره‌از) شناسایی شوند. به دلیل طولانی بودن زمان رشد، از خشک شدن پلیت‌ها باید جلوگیری کرد. محصول با کیفیت ایبرسکو (IBRESco)، با فرمولاسیون بهینه، پایه‌ای قابل اعتماد برای تهیه محیط تخصصی و چالش‌برانگیز کشت این پاتوژن مهم گوارشی فراهم می‌کند.