محیط کشت کمپی آگار بیس 1

محیط کشت پایه آگار کمپیلوباکتر (Campy Agar Base)

محیط کشت Campy Agar Base یک محیط پایه است که شرایط تغذیه‌ای اولیه لازم برای رشد باکتری‌های کمپیلوباکتر را فراهم می‌کند. این باکتری‌ها میکروآئروفیل، گرم‌منفی و دارای نیازهای تغذیه‌ای پیچیده هستند. این پایه معمولاً حاوی ترکیباتی مانند پپتون، عصاره مخمر و عصاره گوشت است. با این حال، محیط نهایی انتخابی و تشخیصی تنها پس از افزودن چندین مکمل ضروری حاصل می‌شود: ۱) خون (معمولاً خون گوسفند دفیبرینه شده ۵-۱۰٪) که فاکتورهای رشد ضروری را تأمین کرده و مواد بازدارنده احتمالی را خنثی می‌کند، ۲) یک مخلوط آنتی‌بیوتیکی که معمولاً شامل وانکومایسین، تری متوپریم، پلی‌میکسین B و آمفوتریسین B است تا از رشد فلور گرم مثبت، گرم منفی و قارچ‌های رقیب جلوگیری کند، و ۳) مواد کاهنده مانند بیسولفیت سدیم که به ایجاد شرایط میکروآئروفیلیک (کم‌اکسیژن) کمک می‌کنند.

این محیط به طور گسترده در آزمایشگاه‌های تشخیصی و کنترل مواد غذایی برای جداسازی کمپیلوباکتر از نمونه‌های مدفوع، مواد غذایی (به ویژه گوشت طیور) و آب استفاده می‌شود. محیط نهایی اغلب با نام‌هایی مانند Campylobacter Blood-Free Selective Agar (CSM) یا mCCDA (اگر حاوی ذغال و دزوکسی کولات باشد) شناخته می‌شود. کلونی‌های کمپیلوباکتر روی این محیط‌ها پس از ۴۸-۷۲ ساعت انکوباسیون در شرایط میکروآئروفیلیک، به صورت صاف، خاکستری، فلزی و مرطوب یا پراکنده دیده می‌شوند.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: جامد (آگار)، پایه غنی/انتخابی (نیازمند افزودن خون و آنتی‌بیوتیک)
• هدف کشت: جداسازی و رشد Campylobacter jejuni و Campylobacter coli
• حالت فیزیکی: پودر پایه (تهیه شده در آب مقطر و اتوکلاو. سپس مکمل‌های استریل (خون، آنتی‌بیوتیک، کاهنده) پس از سرد شدن اضافه می‌شوند).
• ترکیبات کلیدی پایه: پپتون، عصاره مخمر، عصاره گوشت، نمک‌های معدنی، آگار
• مکمل‌های ضروری: خون گوسفند دفیبرینه شده (۵-۱۰٪)، مکمل آنتی‌بیوتیکی کمپیلوباکتر (وانکومایسین، تری‌متوپریم، پلی‌میکسین B، آمفوتریسین B)، اغلب بیسولفیت سدیم و سدیم پیرووات.
• شرایط کشت: پس از افزودن مکمل‌ها، محیط در پلیت ریخته و سفت می‌شود. کشت معمولاً به صورت سطحی انجام می‌گیرد.
• شرایط انکوباسیون: ۴۲ ± ۱ درجه سانتی‌گراد (برای C. jejuni/coli) به مدت ۴۸ تا ۷۲ ساعت در شرایط میکروآئروفیلیک (۵-۶٪ O2، ۱۰٪ CO2، ۸۵٪ N2) با رطوبت بالا. از کیسه‌های گاز، جار یا سیستم‌های جریان گاز استفاده می‌شود.
• خوانش نتیجه: کلونی‌های مشکوک کمپیلوباکتر: صاف، مسطح، پراکنده، به رنگ خاکستری و با جلای فلزی (گاهی اوقات موکوئید). ممکن است به صورت یک لایه نازک گسترش یابند. کلونی‌های گرد و محدب کمتر رایج هستند.
• کنترل کیفیت: رشد خوب و ایجاد کلونی‌های Typical توسط Campylobacter jejuni (ATCC 33291). مهار رشد فلور طبیعی مانند Escherichia coli و Proteus spp.
• کاربرد اصلی: جداسازی کمپیلوباکتر از نمونه‌های مدفوع انسانی، گوشت طیور، و مواد غذایی.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر پایه Campy Agar Base باید در جای خشک نگهداری شود. محیط پایه پس از اتوکلاو باید به سرعت تا ۴۵-۵۰ درجه سانتی‌گراد خنک شود. سپس مکمل‌های استریل (ابتدا آنتی‌بیوتیک‌ها و کاهنده‌ها، سپس خون) باید تحت شرایط استریل اضافه شده و به آرامی مخلوط شوند تا همولیز اتفاق نیفتد. پلیت‌ها را بلافاصله پس از ریختن در کیسه‌های پلاستیکی بسته‌بندی کرده و در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد و دور از نور حداکثر به مدت یک هفته نگهداری کنید. قبل از استفاده، پلیت‌ها باید به دمای اتاق برسند. کشت مستقیم نمونه یا کشت از مرحله غنی‌سازی (مانند Bolton broth) انجام می‌شود. برای ایجاد شرایط میکروآئروفیلیک، استفاده از کیسه‌های گاز مولد (با کاتالیزور) یا سیستم جار با مخلوط گاز از پیش تعیین شده رایج است. انکوباسیون در ۴۲ درجه سانتی‌گراد به انتخاب C. jejuni/coli از سایر کمپیلوباکترها کمک می‌کند. پلیت‌ها باید حداقل ۴۸ ساعت انکوبه شوند. بررسی کلونی‌ها زیر نور با زاویه مناسب برای مشاهده جلای فلزی مهم است. کلونی‌های مشکوک باید با تست‌های تأییدی (شکل مارپیچی در میکروسکوپ، اکسیداز مثبت، حرکت سریع) بررسی شوند. به دلیل ماهیت میکروآئروفیل باکتری، کاهش زمان قرارگیری پلیت در معرض هوا بسیار مهم است.