محیط کشت کمپی آگار بیس 2

محیط کشت پایه آگار کامپیلوباکتر (Campy Agar Base)

محیط کشت Campy Agar Base یک محیط پایه جامد و غنی شده است که اساس تشکیل دهنده محیط‌های انتخابی نهایی مانند “کمپیلوباکتر آگار خون‌دار” (Campylobacter Blood Agar) یا “آگار انتخابی کامپیلوباکتر” است. این محیط حاوی منابع تغذیه‌ای پیچیده (پپتون، عصاره مخمر)، نمک‌ها و به طور کلیدی، سدیم بی‌سولفیت و سدیم پیرووات است که به عنوان عوامل کاهنده عمل کرده و با جذب رادیکال‌های آزاد اکسیژن، شرایط میکروآئروفیلیک (کم اکسیژن) لازم برای رشد کند و حساس کمپیلوباکتر را فراهم می‌کنند. برای تبدیل این پایه به محیط کشت کامل و انتخابی، افزودن خون (اغلب ۵ تا ۱۰٪ خون گوسفند لیز شده) به عنوان منبع رشد و افزودن کوکتلی از آنتی‌بیوتیک‌ها (معمولاً شامل سفاپرازون، وانکومایسین، تری متوپریم، و آمفوتریسین B) برای مهار فلور طبیعی روده و قارچ‌ها ضروری است.

کاربرد اصلی این محیط در آزمایشگاه‌های تشخیص پزشکی و کنترل مواد غذایی برای جداسازی اولیه کمپیلوباکتر spp.، به ویژه Campylobacter jejuni و Campylobacter coli (عوامل اصلی گاستروآنتریت باکتریایی در انسان) از نمونه مدفوع، سواب رکتال یا نمونه‌های گوشت مرغ و سایر مواد غذایی آلوده است. کلنی‌های کمپیلوباکتر روی محیط نهایی خون‌دار، معمولاً خاکستری، فلزساده (خاکستری نقره‌ای)، مسطح و با پخش شدن رطوبتی (موکوس‌مانند) ظاهر می‌شوند.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: پایه جامد (آگار) غنی شده برای تهیه محیط انتخابی کمپیلوباکتر
• هدف کشت: فراهم کردن بستر تغذیه‌ای و شرایط کاهنده برای جداسازی انتخابی باکتری‌های میکروآئروفیل جنس کمپیلوباکتر
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده شده تا حل شود، اتوکلاو و سپس با خون و آنتی‌بیوتیک استریل مخلوط می‌شود).
• ترکیبات کلیدی پایه: پپتون، عصاره مخمر، سدیم کلرید، آگار. ترکیبات کلیدی کاهنده: سدیم بی‌سولفیت، سدیم پیرووات.
• مواد افزودنی ضروری برای محیط کامل: خون گوسفند لیز شده (۵-۱۰٪) و کوکتل آنتی‌بیوتیکی (مثل CCDA Supplement یا مشابه) حاوی عوامل مهارکننده باکتری‌های گرم مثبت و منفی رقابتی و قارچ‌ها.
• شرایط کشت: محیط نهایی در پلیت ریخته شده و با نمونه (معمولاً به روش کشت سطحی یا streak) تلقیح می‌شود.
• شرایط انکوباسیون: شرایط اتمسفر ویژه کمپیلوباکتر: میکروآئروفیلیک (۵-۷٪ اکسیژن، ۸-۱۰٪ دی‌اکسید کربن، ۸۵٪ نیتروژن) معمولاً با استفاده از ژار حاوی شمع (Candle Jar) یا پمپ‌های گاز اختصاصی. دمای ۴۲ درجه سانتی‌گراد (دمای ترجیحی برای C. jejuni/coli و مهار بیشتر فلور همراه) به مدت ۴۸-۷۲ ساعت.
• خوانش نتیجه: مثبت (احتمال کمپیلوباکتر): تشکیل کلنی‌های خاکستری، فلزی، مسطح و گاهی موکوس‌مانند (اسپردینگ). کلنی‌ها ممکن است همولیز آلفا (سبز شدن جزئی) در اطراف خود ایجاد کنند. تأیید: با مشاهده شکل مارپیچی یا S شکل باکتری در رنگ‌آمیزی گرم و تست‌های بیوشیمیایی/آنتی‌ژنی انجام می‌شود.
• کنترل کیفیت: رشد خوب و ویژگی‌های کلنی استاندارد با سویه کنترل مثبت مانند Campylobacter jejuni ATCC 33291. عدم رشد با سویه‌های کنترل منفی مانند E. coli در حضور آنتی‌بیوتیک‌ها.
• کاربرد اصلی: تشخیص عفونت‌های انتریتی ناشی از کمپیلوباکتر و ردیابی آلودگی در زنجیره مواد غذایی (به ویژه طیور).

نکات کاربردی و نگهداری

پودر پایه Campy Agar Base باید در جای خشک نگهداری شود. پس از حل کردن و اتوکلاو، محیط پایه باید تا حدود ۴۵-۵۰ درجه سانتی‌گراد سرد شود. سپس در شرایط استریل، خون لیز شده گوسفند و مکمل آنتی‌بیوتیکی استریل (که معمولاً به صورت محلول فیلتر شده یا قرص است) باید افزوده و به خوبی مخلوط شوند. پلیت‌ها باید بلافاصله پس از آماده شدن استفاده شوند یا در کیسه‌های پلاستیکی درب‌دار و دور از نور در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد برای حداکثر چند هفته نگهداری شوند. قبل از استفاده، پلیت‌ها باید به دمای اتاق رسیده و سطح آنها خشک باشد. شرایط اتمسفر میکروآئروفیلیک ضروری است. عدم رشد ممکن است ناشی از عدم رعایت این شرایط باشد. از آنجایی که کمپیلوباکتر به خشکی حساس است، پلیت‌ها نباید برای مدت طولانی در خارج از انکوباتور باز بمانند. محصول پایه با کیفیت بالا از ایبرسکو (IBRESco)، همراه با مکمل‌های اختصاصی توصیه شده، عملکرد قابل اعتماد و بازیابی بهینه کمپیلوباکتر را از نمونه‌های پیچیده تضمین می‌کند.