محیط کشت کمپی CVA آگار 2

محیط کشت انتخابی کامپیلوباکتر سی‌وی‌ای (Campy CVA Agar)

محیط کشت Campy CVA Agar یک محیط آماده و کامل برای جداسازی کمپیلوباکتر محسوب می‌شود که بر پایه محیط پایه غنی‌شده (شامل پپتون، عصاره مخمر، نمک‌ها و عوامل کاهنده مانند بی‌سولفیت و پیرووات) فرموله شده و با افزودن خون (معمولاً گوسفند) و یک کوکتل آنتی‌بیوتیکی قوی (CVA) تکمیل شده است. آنتی‌بیوتیک‌های موجود در مکمل CVA شامل Cefoperazone (مهارکننده باکتری‌های گرم منفی رقابتی، اما کمپیلوباکتر به آن مقاوم است)، Vancomycin (مهارکننده باکتری‌های گرم مثبت)، و Amphotericin B (ضد قارچ) می‌باشند که به طور همزمان فلور طبیعی مدفوع و آلودگی‌های قارچی را سرکوب کرده و به کمپیلوباکتر اجازه رشد انتخابی می‌دهند.

کاربرد اصلی این محیط در آزمایشگاه‌های تشخیص پزشکی برای تشخیص عفونت‌های گاستروآنتریت ناشی از کمپیلوباکتر از نمونه مدفوع یا سواب رکتال و نیز در آزمایشگاه‌های میکروبیولوژی مواد غذایی برای ردیابی آلودگی کمپیلوباکتر در گوشت طیور، شیر و آب می‌باشد. این محیط به دلیل ترکیب بهینه، حساسیت و بازیابی بالایی برای کمپیلوباکتر فراهم می‌کند.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: محیط جامد (آگار) انتخابی، غنی‌شده و خون‌دار آماده مصرف برای کمپیلوباکتر
• هدف کشت: جداسازی انتخابی و رشد باکتری‌های میکروآئروفیل جنس کمپیلوباکتر از نمونه‌های پیچیده حاوی فلور طبیعی فراوان
• حالت فیزیکی: معمولاً به صورت پلیت‌های از پیش تهیه شده آماده مصرف و یا پودر پایه به همراه مکمل‌های جداگانه. پس از آماده‌سازی، محیطی قرمز و کدر (به دلیل خون) است.
• ترکیبات کلیدی پایه: پپتون، عصاره مخمر، سدیم کلرید، آگار، سدیم بی‌سولفیت، سدیم پیرووات.
• ترکیبات کلیدی افزودنی (مکمل CVA): Cefoperazone، Vancomycin، Amphotericin B و خون گوسفند لیز شده (۵-۱۰٪).
• شرایط کشت: پلیت‌ها با نمونه (مدفوع، سواب رکتال یا سوسپانسیون غذایی) به روش کشت سطحی تلقیح می‌شوند.
• شرایط انکوباسیون: اتمسفر میکروآئروفیلیک اجباری (تقریباً ۵٪ اکسیژن، ۱۰٪ دی‌اکسیدکربن، ۸۵٪ نیتروژن) ایجاد شده با ژار شمعی (Candle Jar) یا سیستم‌های تزریق گاز. دمای ۴۲ درجه سانتی‌گراد به مدت ۴۸ تا ۷۲ ساعت (دمای ۴۲ درجه برای C. jejuni/coli بهینه بوده و باکتری‌های مزوفیل دیگر را مهار می‌کند).
• خوانش نتیجه: مثبت (مشکوک به کمپیلوباکتر): کلنی‌های کوچک، صاف، خاکستری-نقره‌ای (فلزی)، مرطوب و گاهی موکوئیدی که ممکن است به صورت رگه‌های رطوبتی پخش شوند (اسپردینگ). ممکن است هاله سبز رنگ (همولیز آلفا ناقص) در اطراف کلنی مشاهده شود. منفی: عدم رشد یا رشد کلنی‌های رنگی متفاوت (نشانه ارگانیسم‌های غیر هدف).
• کنترل کیفیت: رشد مطلوب و تشکیل کلنی‌های با مشخصات معمول با سویه Campylobacter jejuni ATCC 33291. عدم رشد سویه Escherichia coli ATCC 25922 به دلیل وجود آنتی‌بیوتیک‌ها.
• کاربرد اصلی: تست تشخیصی مستقیم کمپیلوباکتریوز در آزمایشگاه‌های بیمارستانی و بهداشتی و کنترل کیفیت میکروبیولوژی مواد غذایی.

نکات کاربردی و نگهداری

پلیت‌های آماده Campy CVA Agar باید در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد و دور از نور نگهداری شوند و قبل از استفاده به دمای اتاق برسند. اگر به صورت پودر و مکمل جداگانه تهیه می‌شود، پس از اتوکلاو محیط پایه و سرد شدن آن به ۴۵-۵۰ درجه سانتی‌گراد، مکمل آنتی‌بیوتیکی استریل (معمولاً فیلتر-استریل) و خون لیز شده گوسفند باید در شرایط آسپتیک اضافه و مخلوط شوند. پلیت‌ها باید ظرف چند هفته پس از آماده شدن مصرف شوند. رعایت دقیق شرایط میکروآئروفیلیک برای موفقیت کشت حیاتی است. از خشک شدن پلیت‌ها باید جلوگیری کرد. نمونه‌های مدفوع ممکن است مستقیماً کشت داده شوند یا ابتدا در یک محیط enrichment مایع کشت داده شوند. محیط Campy CVA Agar از ایبرسکو (IBRESco) با کیفیت و عملکرد ثابت، یکی از محیط‌های استاندارد طلایی (Gold Standard) برای جداسازی کمپیلوباکتر محسوب می‌شود. تفسیر نتایج باید توسط پرسنل مجرب انجام گیرد و کلنی‌های مشکوک با تست‌های تأییدی (مانند تست اکسیداز مثبت، حرکت مارپیچی، و تست‌های بیوشیمیایی یا مولکولی) تأیید شوند.