محیط کشت گلوکز بروموکرزول پرپل آگار 3

محیط کشت آگار گلوکز بروموکروزول بنفش (Glucose Bromocresol Purple Agar)

محیط کشت Glucose Bromocresol Purple Agar که بر پایه تریپتون و عصاره مخمر غنی شده است، یک محیط انتخابی-تشخیصی برای Bacillus cereus محسوب می‌شود. کلیدی‌ترین جزء این محیط، گلوکز به عنوان سوبسترای قابل تخمیر و نشانگر بروموکروزول بنفش است. B. cereus و برخی گونه‌های نزدیک به آن، گلوکز را تخمیر کرده و اسید تولید می‌کنند. این اسیدیته باعث تغییر رنگ نشانگر از بنفش به زرد روشن در اطراف کلونی‌ها می‌شود که یک شاخص تشخیصی اولیه مهم است. همچنین حضور پلی‌میکسین B به عنوان آنتی‌بیوتیک انتخابی، رشد باکتری‌های گرم‌منفی و بسیاری از گرم‌مثبت‌ها را مهار می‌کند، در حالی که B. cereus معمولاً به آن مقاوم است. گاهی اوقات پیروات سدیم نیز به محیط اضافه می‌شود تا رشد و اسپورزایی B. cereus را تحریک کند.

کاربرد اصلی این محیط در آزمایشگاه‌های کنترل کیفیت مواد غذایی و بهداشت محیط، مطابق با استانداردهایی مانند FDA/BAM و ISO 7932، برای شمارش و تشخیص احتمالی Bacillus cereus در غذاهایی مانند برنج، محصولات لبنی، ادویه‌جات و مواد غذایی خشک شده است. کلونی‌های مشکوک بر روی این محیط سپس با تست‌های تأییدی مانند تست هایمولیز، حرکت و تشکیل کریستال توکسین مورد بررسی بیشتر قرار می‌گیرند.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: جامد (آگار)، انتخابی-تشخیصی برای باسیلوس سرئوس
• هدف کشت: جداسازی، شمارش و شناسایی اولیه Bacillus cereus و گروه باسیلوس سرئوس از نمونه‌های غذایی
• حالت فیزیکی: پودر (حاوی تریپتون، عصاره مخمر، گلوکز، بروموکروزول بنفش و آگار) که پس از حل کردن و اتوکلاو، قبل از جامد شدن، آنتی‌بیوتیک پلی‌میکسین B (و گاهی پیروات) به صورت استریل اضافه می‌شود.
• ترکیبات کلیدی: تریپتون، عصاره مخمر، گلوکز، بروموکروزول بنفش، پلی‌میکسین B (مکمل)، پیروات سدیم (در برخی فرمولاسیون‌ها)، آگار
• اصول آزمون: انتخاب‌پذیری: پلی‌میکسین B باکتری‌های رقیب را مهار می‌کند. تشخیص: تخمیر گلوکز توسط باسیلوس سرئوس و تولید اسید باعث تغییر رنگ نشانگر pH به زرد در اطراف کلونی‌ها می‌شود. کلونی‌های B. cereus معمولاً بزرگ، کدر و با حاشیه نامنظم و هاله زرد رنگ هستند.
• شرایط کشت: نمونه غذایی معمولاً پس از تهیه سوسپانسیون و رقت‌سازی، به روش spread plate یا pour plate روی محیط کشت داده می‌شود.
• شرایط انکوباسیون: ۳۰ تا ۳۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۸ تا ۲۴ ساعت. گاهی انکوباسیون تا ۴۸ ساعت برای مشاهده کامل واکنش و اسپورزایی توصیه می‌شود.
• خوانش نتیجه: مثبت برای باسیلوس سرئوس (احتمالی): کلونی‌های کدر تا صورتی-نارنجی با هاله زرد واضح در اطراف آنها (ناشی از اسیدی شدن). منفی: عدم رشد، یا رشد کلونی‌هایی که هاله زرد ایجاد نمی‌کنند (مانند برخی گونه‌های باسیلوس غیرسرئوس).
• کنترل کیفیت: سویه Bacillus cereus ATCC 11778: رشد خوب با کلونی‌های کدر و هاله زرد. سویه Escherichia coli ATCC 25922: مهار رشد یا رشد بسیار ضعیف.
• کاربرد اصلی: روش استاندارد برای شمارش و تشخیص اولیه Bacillus cereus در مواد غذایی و نمونه‌های محیطی مرتبط با مسمومیت غذایی.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر پایه محیط Glucose Bromocresol Purple Agar از ایبرسکو (IBRESco) را در جای خشک و خنک نگهداری کنید. آنتی‌بیوتیک پلی‌میکسین B (و محلول پیروات در صورت نیاز) حساس به حرارت است و باید پس از اتوکلاو و خنک شدن محیط پایه به حدود ۴۵-۵۰ درجه سانتی‌گراد، به صورت استریل (فیلتر شده) اضافه گردد. از جوشاندن طولانی‌مدت محیط پایه حاوی گلوکز خودداری کنید. محیط را به آرامی و کاملاً مخلوط کرده و بلافاصله در پلیت بریزید. پلیت‌های آماده را می‌توان در کیسه‌های پلاستیکی بسته‌بندی و در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد و دور از نور برای مدت محدود (معمولاً ۱-۲ هفته) نگهداری کرد. قبل از استفاده، پلیت‌ها باید به دمای اتاق رسیده و سطح آنها خشک باشد. از آنجایی که هدف اغلب شمارش است، رقت‌های مناسب از نمونه غذایی تهیه شود. برای افزایش بازیابی سلول‌های آسیب دیده حرارتی، ممکن است پیش‌غنی‌سازی نمونه در Buffered Peptone Water توصیه شود. پس از انکوباسیون، کلونی‌های مشکوک (دارای هاله زرد) باید شمارش شده و برای تأیید نهایی (تست هایمولیز روی Blood Agar، تست حرکت، تست لسیتیناز روی Mannitol Egg Yolk Polymyxin Agar) زیرکشت داده شوند. برخی گونه‌های B. mycoides یا B. thuringiensis نیز ممکن است واکنش مشابهی نشان دهند، بنابراین شناسایی تا سطح گونه نیاز به تست‌های بیشتری دارد. تفسیر هاله زرد باید تحت نور مناسب و در برابر یک پس‌زمینه سفید انجام گیرد.