محیط کشت BG سولفا آگار 1

محیط کشت آگار برلیانت گرین سولفادیازین (Brilliant Green Sulfa Agar)

محیط کشت Brilliant Green Sulfa Agar یک محیط جامد انتخابی است که رشد باکتری‌های گرم منفی روده‌ای را به طور کلی پشتیبانی می‌کند، اما با دو عامل بازدارنده قوی، انتخابی بودن شدیدی را اعمال می‌کند: برلیانت گرین (یک رنگ بازدارنده) و سولفادیازین (یک آنتی‌بیوتیک سولفونامیدی). این ترکیب به طور موثری رشد باکتری‌های گرم مثبت و بسیاری از باکتری‌های گرم منفی روده‌ای غیرهدف (مانند Escherichia coli، Klebsiella و Enterobacter) را مهار می‌کند، در حالی که به بیشتر گونه‌های سالمونلا (به جز تیفوزا و پاراتیفوزا) اجازه رشد می‌دهد. لاکتوز و سوکروز موجود در محیط همراه با شناساگر فنول رد، تخمیر قندها را نشان می‌دهند. سالمونلاها که معمولاً لاکتوز و سوکروز را تخمیر نمی‌کنند، کلونی‌های قرمز تا صورتی روی زمینه قرمز-نارنجی محیط ایجاد می‌کنند. در مقابل، باکتری‌های تخمیرکننده لاکتوز/سوکروز که از عوامل بازدارنده فرار کنند، کلونی‌های زرد با هاله زرد ایجاد می‌نمایند.

این محیط به طور گسترده در پروتکل‌های استاندارد کنترل کیفیت مواد غذایی (مانند ISO 6579) برای جداسازی سالمونلا از محصولات گوشتی، تخم‌مرغ، شیر و سبزیجات استفاده می‌شود. محیط کشت BG Sulfa Agar اغلب به عنوان یکی از محیط‌های انتخابی در یک پنل (همراه با محیط‌هایی مانند XLD یا Hektoen) پس از مرحله غنی‌سازی اولیه به کار می‌رود تا حساسیت و ویژگی تشخیص را افزایش دهد. به دلیل خاصیت بازدارندگی قوی، گاهی برای نمونه‌های با فلور میکروبی بسیار غلیظ (مانند مدفوع یا فاضلاب) مناسب‌تر است.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: جامد (آگار)، انتخابی/تشخیصی قوی
• هدف کشت: جداسازی انتخابی گونه‌های Salmonella (غیر از تیفوزا و پاراتیفوزا)
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت تا حل شدن و سپس اتوکلاو. سولفادیازین معمولاً پس از اتوکلاو به صورت محلول استریل اضافه می‌شود).
• ترکیبات کلیدی: پپتون، عصاره مخمر، لاکتوز، سوکروز، برلیانت گرین، سولفادیازین، شناساگر فنول رد، آگار
• شرایط کشت: محیط در پلیت ریخته و سفت می‌شود. کشت به صورت خطی از کشت غنی‌سازی شده انجام می‌گیرد.
• شرایط انکوباسیون: ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۸ تا ۲۴ ساعت. بازرسی در ۲۴ و ۴۸ ساعت ممکن است لازم باشد.
• خوانش نتیجه: کلونی‌های مشکوک سالمونلا: کوچک تا متوسط (۲-۳ میلی‌متر)، قرمز، صورتی یا سفید (به دلیل عدم تخمیر قند و قلیایی ماندن محیط) روی یک زمینه قرمز-صورتی یا نارنجی. کلونی‌های غیرسالمونلا: زرد تا زرد-سبز (تخمیرکننده قند) با یا بدون هاله زرد.
• کنترل کیفیت: رشد خوب و ایجاد کلونی‌های قرمز/صورتی با Salmonella Typhimurium (ATCC 14028). مهار یا رشد بسیار ضعیف Escherichia coli (ATCC 25922).
• کاربرد اصلی: جداسازی سالمونلا از مواد غذایی، خوراک دام، نمونه‌های محیطی و گاهی نمونه‌های بالینی (به جز موارد مشکوک به تب تیفوئید).

نکات کاربردی و نگهداری

پودر پایه BG Sulfa Agar (بدون سولفادیازین) باید در جای خشک و دور از نور نگهداری شود. سولفادیازین معمولاً به صورت جداگانه تهیه و فیلتر-استریل می‌شود و پس از اتوکلاو کردن محیط پایه و خنک شدن آن تا ۴۵-۵۰ درجه سانتی‌گراد، تحت شرایط استریل اضافه می‌گردد. از حرارت دادن محیط پس از افزودن سولفادیازین خودداری کنید. پلیت‌های آماده شده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد و دور از نور برای حداکثر یک هفته نگهداری کرد. قبل از استفاده، پلیت‌ها باید به دمای اتاق رسانده شوند. از آنجایی که برلیانت گرین نسبت به نور حساس است و ممکن است خاصیت بازدارندگی خود را از دست بدهد، پلیت‌ها باید از نور مستقیم محافظت شوند. برای کشت، معمولاً یک لوپ از کشت غنی‌سازی شده (مانند Rappaport-Vassiliadis یا Tetrathionate Broth) به صورت خطی کشت داده می‌شود. تفسیر رنگ کلونی‌ها باید تحت نور مناسب انجام شود. گونه‌های سالمونلا که سوکروز را تخمیر می‌کنند (نادر) ممکن است کلونی زرد ایجاد کنند. همچنین، Proteus spp. ممکن است به صورت کلونی‌های قرمز بدون هاله رشد کند (سواگرمن منفی). بنابراین، کلونی‌های مشکوک باید برای تأیید با تست‌های بیوشیمیایی و سرولوژیکی بیشتر بررسی شوند. این محیط برای جداسازی Salmonella Typhi و Paratyphi توصیه نمی‌شود، زیرا این گونه‌ها معمولاً توسط برلیانت گرین مهار می‌شوند.