محیط کشت BHI براث 2

محیط کشت براث انفوزیون مغز و قلب (BHI Broth)

محیط کشت Brain Heart Infusion Broth فرم مایع محیط جامد BHI آگار است و به دلیل غنای بالای مواد مغذی، یک محیط ایده‌آل برای کشت مایع میکروارگانیسم‌ها محسوب می‌شود. این محیط حاوی عصاره مغز گاو (منبع اسیدهای آمینه با زنجیره بلند و اسیدهای چرب)، عصاره قلب گاو (منبعی غنی از فاکتورهای رشد و مواد معدنی) و پپتون است که در کنار هم، نیازهای پیچیده تغذیه‌ای باکتری‌های سخت‌پرور (Fastidious) مانند استرپتوکوک‌ها، نایسریاها و برخی بی‌هوازی‌ها را به طور کامل برآورده می‌کنند. وجود دکستروز نیز به عنوان یک منبع کربن قابل تخمیر، انرژی سریعی برای رشد اولیه فراهم می‌آورد.

کاربردهای اصلی BHI Broth شامل: تهیه اینوکولوم (کشت آغازگر) برای آزمایش‌های مختلف، انجام مطالعات رشد میکروبی و سنجش تولید زیست‌توده (بیومس)، کشت نمونه‌های بالینی مایع (مانند خون، مایع مفصل، مایع مغزی-نخاعی) برای افزایش حساسیت تشخیص، کشت قارچ‌ها و مخمرها، و نیز به عنوان محیط پایه برای تهیه محیط‌های خوندار مایع (مثلاً با افزودن خون برای کشت باکتری‌های بسیار سخت‌پرور) است. این محیط همچنین به دلیل پشتیبانی از رشد خوب بی‌هوازی‌ها، در کشت باکتری‌های بی‌هوازی اجباری نیز کاربرد دارد.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث)، عمومی/غنی (All Purpose/Enriched)
• هدف کشت: رشد و تکثیر طیف وسیعی از باکتری‌ها، قارچ‌ها و مخمرها در فاز مایع
• حالت فیزیکی: پودر (حل شونده در آب مقطر و سپس استریل شده با اتوکلاو)
• ترکیبات کلیدی: عصاره مغز گاو، عصاره قلب گاو، پپتون، دکستروز (گلوکز)، سدیم کلرید، دی‌پتاسیم فسفات
• شرایط کشت: محیط در لوله‌ها، فلاسک‌ها یا بطری‌های مناسب ریخته می‌شود. کشت می‌تواند ایستا (Static) یا همراه با تکان‌دهی (Shaking) باشد.
• شرایط انکوباسیون: بسته به میکروارگانیسم هدف: معمولاً ۳۵-۳۷ درجه سانتی‌گراد برای باکتری‌ها به مدت ۱۸-۲۴ ساعت (گاهی بیشتر)، ۲۵-۳۰ درجه سانتی‌گراد برای قارچ‌ها به مدت ۲-۵ روز. شرایط اتمسفر می‌تواند هوازی، بی‌هوازی یا همراه با CO2 افزایش یافته باشد.
• خوانش نتیجه: رشد به صورت کدورت (Turbidity) قابل مشاهده و اغلب با تشکیل رسوب (Pellet) یا فلکی (Flocculent) همراه است. رشد کمی معمولاً با اندازه‌گیری جذب نوری (Optical Density) در طول موج ۶۰۰ نانومتر سنجیده می‌شود.
• کنترل کیفیت: ایجاد کدورت غلیظ و یکنواخت توسط باکتری‌های سخت‌پرور مانند Streptococcus pneumoniae (ATCC 6305) و نیز رشد خوب قارچ‌هایی مانند Candida albicans (ATCC 10231).
• کاربرد اصلی: تهیه کشت مایع با تراکم بالا برای آزمایش‌های میکروبیولوژی، غنی‌سازی نمونه‌های بالینی، مطالعات کشت مایع و تولید زیست‌توده.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر Brain Heart Infusion Broth باید در جای خشک نگهداری شود. محیط پس از حل شدن در آب مقطر، باید به خوبی مخلوط شده و سپس اتوکلاو شود. به دلیل وجود دکستروز، از حرارت دادن بیش از حد (کاراملیزاسیون) خودداری شود. محیط استریل آماده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد برای چند هفته نگهداری کرد. قبل از تلقیح، محیط باید به دمای مناسب برسد. حجم محیط در فلاسک نباید بیش از ۲۰٪ حجم کل فلاسک باشد تا اکسیژن‌رسانی کافی فراهم شود (مگر برای کشت بی‌هوازی). برای تهیه اینوکولوم، معمولاً از یک کلونی تازه یا کشت قدیمی‌تر به عنوان مایه تلقیح استفاده می‌شود. برای کشت نمونه‌های بالینی (مانند خون)، معمولاً نسبت ۱:۱۰ نمونه به محیط رعایت می‌شود. در کشت ایستای بی‌هوازی، لوله‌ها باید کاملاً پر شده و درب‌بسته شوند. اندازه‌گیری رشد با اسپکتروفتومتر نیاز به رقیق‌سازی نمونه در صورتی که کدورت خارج از محدوده خطی دستگاه باشد، دارد. پس از کشت، سلول‌ها را می‌توان با سانتریفیوژ جمع‌آوری کرد. برای اهداف انتخابی، می‌توان آنتی‌بیوتیک‌ها یا ضدقارچ‌ها به محیط اضافه نمود. این محیط به خودی خود حاوی شناساگر نیست، بنابراین برای تست‌های تخمیر قند مناسب نیست مگر آنکه شناساگر به آن اضافه شود.