محیط کشت BPLS آگار 2

محیط کشت آگار برلیانت گرین فنول رد لاکتوز سوکروز (BPLS Agar)

محیط کشت BPLS Agar که مخفف Brilliant green Phenol red Lactose Sucrose Agar است، یک محیط انتخابی-تشخیصی است که ویژگی‌های محیط‌های Brilliant Green Agar و Phenol Red Agar را ترکیب می‌کند. وجود برلیانت گرین به عنوان یک رنگ بازدارنده قوی، رشد بسیاری از باکتری‌های گرم مثبت و گرم منفی روده‌ای غیرهدف (مانند E. coli، Klebsiella و Enterobacter) را مهار می‌کند، در حالی که به سالمونلاها و برخی پاتوژن‌های مرتبط اجازه رشد می‌دهد. این محیط حاوی دو قند، لاکتوز و سوکروز، همراه با شناساگر فنول رد است. باکتری‌هایی که بتوانند یک یا هر دوی این قندها را تخمیر کنند، اسید تولید کرده و محیط را زرد می‌کنند. سالمونلاها و آریزوناها معمولاً هیچ یک از این قندها را تخمیر نمی‌کنند، بنابراین کلونی‌ها و محیط اطراف آنها به رنگ قرمز یا صورتی (قلیایی) باقی می‌مانند.

این محیط به طور سنتی در میکروبیولوژی غذایی و دامپزشکی برای جداسازی سالمونلا از نمونه‌هایی مانند گوشت، تخم‌مرغ و مواد غذایی استفاده می‌شود. محیط کشت BPLS Agar اغلب به عنوان یکی از محیط‌های انتخابی در یک پنل چندگانه پس از مرحله غنی‌سازی اولیه (مانند تلقیح در Tetrathionate Broth) به کار می‌رود. کلونی‌های مشکوک سالمونلا روی این محیط به رنگ قرمز یا صورتی روی یک زمینه زرد (اگر باکتری‌های تخمیرکننده قند وجود داشته باشند) یا قرمز-نارنجی دیده می‌شوند.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: جامد (آگار)، انتخابی-تشخیصی
• هدف کشت: جداسازی و افتراق Salmonella و Arizona از سایر انتروباکتریاسه‌ها بر اساس عدم تخمیر لاکتوز و سوکروز
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده شده تا حل شود و سپس اتوکلاو).
• ترکیبات کلیدی: پپتون، عصاره مخمر، لاکتوز، سوکروز، برلیانت گرین، شناساگر فنول رد، آگار، نمک‌ها
• شرایط کشت: محیط در پلیت ریخته و سفت می‌شود. کشت به صورت خطی از کشت غنی‌سازی شده انجام می‌گیرد.
• شرایط انکوباسیون: ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۸ تا ۲۴ ساعت. نتایج ممکن است در ۴۸ ساعت نیز خوانده شوند.
• خوانش نتیجه: کلونی‌های مشکوک سالمونلا/آریزونا: قرمز، صورتی یا سفید (به دلیل عدم تخمیر قند و قلیایی ماندن محیط) روی یک زمینه که ممکن است زرد (اگر تخمیرکننده‌ای رشد کند) یا قرمز-نارنجی باشد. کلونی‌های غیرمشکوک (تخمیرکننده لاکتوز/سوکروز): زرد با یا بدون هاله زرد.
• کنترل کیفیت: رشد خوب و ایجاد کلونی‌های قرمز/صورتی با Salmonella Typhimurium (ATCC 14028). رشد مهارشده یا کلونی‌های زرد با Escherichia coli (ATCC 25922).
• کاربرد اصلی: جداسازی سالمونلا از مواد غذایی، خوراک دام و نمونه‌های محیطی. این محیط برای جداسازی Salmonella Typhi (عامل تب تیفوئید) مناسب نیست، زیرا توسط برلیانت گرین مهار می‌شود.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر محیط کشت BPLS Agar باید در جای خشک و دور از نور نگهداری شود، زیرا برلیانت گرین به نور حساس است. محیط آماده شده را می‌توان در پلیت‌ها ریخته و در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد و دور از نور برای حداکثر یک هفته نگهداری کرد. قبل از استفاده، پلیت‌ها باید به دمای اتاق رسانده شوند. برای کشت، معمولاً یک لوپ از کشت غنی‌سازی شده (مانند Tetrathionate یا Rappaport-Vassiliadis broth) به صورت خطی کشت داده می‌شود. تفسیر رنگ کلونی‌ها باید تحت نور مناسب انجام شود. برخی از سویه‌های سالمونلا ممکن است سوکروز را به تأخیر تخمیر کنند که منجر به کلونی‌های زرد کمرنگ پس از ۴۸ ساعت می‌شود. همچنین، برخی از باکتری‌های غیرهدف مانند Proteus spp. ممکن است به صورت کلونی‌های قرمز بدون هاله رشد کنند (سواگرمن منفی). بنابراین، کلونی‌های مشکوک باید برای تأیید با تست‌های بیوشیمیایی و سرولوژیکی بیشتر بررسی شوند. از آنجایی که برلیانت گرین ممکن است برای برخی سویه‌های سالمونلا نیز تا حدی بازدارنده باشد، استفاده از این محیط در کنار یک محیط انتخابی دیگر (مانند XLD) توصیه می‌شود تا حساسیت تشخیص افزایش یابد. پلیت‌ها نباید برای انکوباسیون طولانی‌مدت (بیش از ۴۸ ساعت) استفاده شوند، زیرا ممکن است رنگ‌دانه متابولیک تولید شود و تفسیر را مختل کند.