محیط کشت BROLAC آگار 2

محیط کشت آگار برموتیمول بلو لاکتوز (BROLAC Agar)

محیط کشت BROLAC Agar که مخفف Bromothymol Blue Lactose Agar است، یک محیط انتخابی بر پایه لاکتوز می‌باشد. خاصیت انتخابی آن عمدتاً از طریق تنظیم pH اسیدی اولیه محیط (حدود ۶.۰) و گاهی افزودن نمک‌های صفراوی یا سایر بازدارنده‌های ملایم حاصل می‌شود که از رشد بیش ازحد باکتری‌های گرم مثبت جلوگیری می‌کند. جزء تشخیصی کلیدی، وجود لاکتوز به عنوان تنها منبع کربوهیدرات و شناساگر برموتیمول بلو است. این شناساگر در pH خنثی سبز-آبی، در pH اسیدی زرد و در pH قلیایی آبی است. باکتری‌های کلی‌فرم (مانند E. coli، Klebsiella) که لاکتوز را سریع تخمیر می‌کنند، مقادیر زیادی اسید تولید کرده و باعث تغییر رنگ محیط به زرد در اطراف کلونی می‌شوند. باکتری‌های غیرتخمیرکننده لاکتوز یا تخمیرکننده‌های کند، ممکن است محیط را قلیایی کرده (به دلیل استفاده از پپتون) و باعث تغییر رنگ به آبی شوند یا رنگ سبز اولیه را حفظ کنند.

این محیط به طور سنتی در صنایع لبنی برای شمارش کلی‌فرم‌ها به عنوان شاخص بهداشت و کیفیت فرآیند، و نیز در آزمایشگاه‌های آب برای غربالگری اولیه استفاده می‌شده است. کلونی‌های کلی‌فرم روی این محیط معمولاً زرد (با یا بدون هاله زرد) روی یک زمینه سبز-آبی هستند. محیط کشت BROLAC Agar نسبت به محیط‌های حاوی بازدارنده‌های قوی‌تر (مانند Violet Red Bile Agar) ملایم‌تر است و ممکن است طیف وسیع‌تری از کلی‌فرم‌ها را بازیابی کند، اما ممکن است با رشد برخی باکتری‌های غیرهدف نیز همراه باشد.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: جامد (آگار)، انتخابی-تشخیصی ملایم
• هدف کشت: جداسازی و شمارش کلی‌فرم‌ها در لبنیات، آب و برخی مواد غذایی
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده شده تا حل شود و سپس اتوکلاو)
• ترکیبات کلیدی: پپتون، لاکتوز، عصاره مخمر، برموتیمول بلو، آگار. برخی فرمولاسیون‌ها ممکن حاوی نمک‌های صفراوی یا سایر عوامل انتخابی باشند.
• شرایط کشت: محیط در پلیت ریخته و سفت می‌شود. نمونه معمولاً به روش Pour Plate (برای لبنیات) یا Spread Plate کشت داده می‌شود.
• شرایط انکوباسیون: ۳۲ تا ۳۵ درجه سانتی‌گراد (برای کلی‌فرم‌های مزوفیل) به مدت ۱۸ تا ۲۴ ساعت. گاهی تا ۴۸ ساعت انکوبه می‌شود.
• خوانش نتیجه: کلونی‌های مشکوک کلی‌فرم (لاکتوز مثبت): زرد (با هر سایه‌ای از زرد کمرنگ تا زرد پررنگ) با یا بدون هاله زرد در محیط. کلونی‌های غیرکلی‌فرم (لاکتوز منفی): آبی، سبز-آبی یا بدون تغییر رنگ (نگه‌دارنده رنگ سبز اولیه محیط).
• کنترل کیفیت: رشد خوب و تشکیل کلونی‌های زرد با هاله توسط Escherichia coli (ATCC 25922). رشد محدود یا کلونی‌های آبی/سبز توسط Pseudomonas aeruginosa (ATCC 27853).
• کاربرد اصلی: شمارش کلی‌فرم‌ها در شیر خام، پاستوریزه، فرآورده‌های لبنی و آب بر اساس استانداردهای قدیمی‌تر صنعت لبنیات.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر BROLAC Agar باید در جای خشک و دور از نور نگهداری شود، زیرا شناساگر برموتیمول بلو نسبت به نور حساس است. محیط آماده شده را می‌توان در پلیت‌ها ریخته و در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد و دور از نور برای حداکثر دو هفته نگهداری کرد. قبل از استفاده، پلیت‌ها باید به دمای اتاق رسانده شوند. برای کشت محصولات لبنی، روش استاندارد Pour Plate با رقت‌های مشخص متداول است. پس از انکوباسیون، تفسیر رنگ باید تحت نور سفید طبیعی یا نور فلورسنت انجام شود، زیرا نور زرد ممکن است تفسیر را مختل کند. برخی از کلی‌فرم‌ها (مانند برخی سویه‌های Enterobacter) ممکن است تخمیر کندی داشته باشند و فقط یک هاله زرد ضعیف ایجاد کنند. باکتری‌های غیرکلی‌فرم که از پپتون استفاده می‌کنند (مانند Pseudomonas) ممکن است محیط را قلیایی کرده و کلونی‌های آبی ایجاد کنند. از آنجایی که انتخابی بودن ملایم است، ممکن است رشد برخی مخمرها یا باکتری‌های گرم مثبت لاکتوز مثبت نیز رخ دهد. بنابراین، برای تأیید نهایی، ممکن است لازم باشد کلونی‌های مشکوک بر روی محیط انتخابی قوی‌تر (مانند Violet Red Bile Agar) کشت مجدد شوند. این محیط ممکن است در بسیاری از آزمایشگاه‌های مدرن با محیط‌های کروموژنیک یا انتخابی‌تر جایگزین شده باشد، اما هنوز در برخی تنظیمات خاص یا بر اساس استانداردهای داخلی کارخانه‌ها مورد استفاده قرار می‌گیرد.