محیط کشت DEV تریپتوفان براث

محیط کشت تریپتوفان دی‌ای‌وی (DEV Tryptophan Broth)

محیط کشت DEV Tryptophan Broth یک محیط کمپلکس و غنی‌شده حاوی تریپتون است که به طور طبیعی سرشار از اسید آمینه تریپتوفان می‌باشد. برخی از باکتری‌ها آنزیم تریپتوفاناز را تولید می‌کنند که تریپتوفان را هیدرولیز کرده و متابولیت‌های متعددی از جمله ایندول (Indole)، اسید پیروویک و آمونیاک تولید می‌کند. پس از دوره انکوباسیون، با افزودن معرف‌های شیمیایی حاوی پارا-دیمتیل آمینو بنزآلدئید (مانند معرف کواک یا اهرلیش) به محیط کشت، در صورت حضور ایندول، یک کمپلکس رزینی قرمز-صورتی (روبین) یا قهوه‌ای مایل به قرمز تشکیل می‌شود. عدم تشکیل این رنگ نشان‌دهنده منفی بودن تست ایندول است.

کاربرد اصلی این محیط در آزمایشگاه‌های میکروبیولوژی تشخیصی به عنوان بخشی از مجموعه تست‌های استاندارد IMViC (ایندول، متیل رد، Voges-Proskauer، سیترات) برای شناسایی و افتراق اعضای خانواده انتروباکتریاسه، به ویژه افتراق Escherichia coli (ایندول مثبت) از Klebsiella و Enterobacter (ایندول منفی) و نیز برای شناسایی سایر باکتری‌های گرم مثبت و منفی (مانند پروتئوس، هافنیا، ویبریو و …) است.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث) افتراقی برای تست آنزیم تریپتوفاناز (تست ایندول)
• هدف کشت: تشخیص تولید آنزیم تریپتوفاناز و متابولیت ایندول توسط باکتری‌ها
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده تا حل شود، سپس در لوله‌های کوچک تقسیم و استریل می‌شود). محیط مایع و کهربایی روشن است.
• ترکیبات کلیدی: تریپتون یا پپتون غنی از تریپتوفان (منبع تریپتوفان)، سدیم کلرید (تنظیم اسمولاریتی).
• معرف تست ایندول (افزوده پس از کشت): معرف کواک (Kovac’s) (حامل پارا-دیمتیل آمینو بنزآلدئید در اسید هیدروکلریک و ایزوآمیل الکل) یا معرف اِهرلیش (Ehrlich’s) (برای باکتری‌های غیرانتروباکتریاسه و بی‌هوازی).
• شرایط کشت: لوله‌های حاوی ۳-۵ میلی‌لیتر محیط، با یک اینوکولوم سبک از کشت تازه باکتری (۱۸-۲۴ ساعته) تلقیح می‌شوند.
• شرایط انکوباسیون: دمای ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۴ تا ۴۸ ساعت (برای اکثر باکتری‌ها ۲۴ ساعت کافی است؛ برخی مانند پروتئوس ممکن است در ۱۶-۱۸ ساعت مثبت شوند).
• خوانش نتیجه (پس از افزودن معرف): مثبت: تشکیل یک حلقه یا لایه قرمز-صورتی (آلبالویی) تا قرمز در سطح محلول، دقیقاً پس از افزودن معرف کواک و تکان دادن ملایم. منفی: رنگ زرد یا کهربایی معرف در سطح باقی می‌ماند (بدون رنگ قرمز).
• کنترل کیفیت: سویه مثبت: Escherichia coli ATCC 25922 (ایندول مثبت قوی). سویه منفی: Klebsiella pneumoniae ATCC 13883 (ایندول منفی).
• کاربرد اصلی: تست ایندول به عنوان بخشی از پروتکل‌های استاندارد شناسایی انتروباکتریاسه‌ها (IMViC) و سایر باکتری‌های گرم منفی و مثبت در آزمایشگاه تشخیصی.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر DEV Tryptophan Broth باید در جای خشک نگهداری شود. پس از تهیه و توزیع در لوله‌ها، استریل‌سازی با اتوکلاو انجام می‌شود. محیط آماده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد نگهداری کرد. معرف کواک باید تازه و در ظرف تیره نگهداری شود، زیرا به نور و اکسیداسیون حساس است. پس از دوره انکوباسیون، حدود ۰.۲ تا ۰.۵ میلی‌لیتر از معرف کواک به لوله کشت اضافه شده و به آرامی تکان داده می‌شود. خوانش نتیجه باید بلافاصله انجام شود. برای باکتری‌های بی‌هوازی یا برخی غیرانتروباکتریاسه‌ها، از معرف اهرلیش استفاده می‌شود که پس از افزودن نیاز به انکوباسیون مجدد در دمای اتاق به مدت ۱۰ دقیقه دارد. برخی سویه‌ها ممکن است واکنش ضعیف (صورتی کمرنگ) نشان دهند که همچنان مثبت در نظر گرفته می‌شود. محصول با کیفیت ایبرسکو (IBRESco)، با بهینه‌سازی میزان تریپتوفان، نتایج واضح و قابل اطمینانی را برای این تست بیوشیمیایی پرکاربرد و حیاتی فراهم می‌آورد.