محیط کشت DEV گلوتامات براث

محیط کشت گلوتامات دی‌ای‌وی (DEV Glutamate Broth)

محیط کشت DEV Glutamate Broth یک محیط کم‌مصرف است که اساساً حاوی L-گلوتامات سدیم (منو سدیم گلوتامات) به عنوان تنها منبع کربن و انرژی، نمک‌های معدنی و شناساگر بنفش کریزول رد (Cresol Red) می‌باشد. اصل تست بر پایه فعالیت آنزیم گلوتامات دکربوکسیلاز است که توسط برخی باکتری‌ها تولید می‌شود. این آنزیم، گروه کربوکسیل اسید آمینه L-گلوتامات را حذف کرده و آن را به گاما-آمینوبوتیریک اسید (GABA) تبدیل می‌کند که یک آمین قلیایی است. تولید این آمین باعث قلیایی شدن محیط و تغییر رنگ شناساگر از زرد (در شرایط اسیدی اولیه) به بنفش/ارغوانی (در شرایط قلیایی) می‌شود. عدم تغییر رنگ نشان‌دهنده عدم فعالیت آنزیم است.

کاربرد اصلی این محیط در آزمایشگاه‌های تشخیصی به عنوان یک تست بیوشیمیایی مکمل برای افتراق گونه‌های انتروباکتر (که معمولاً مثبت هستند) از گونه‌های کلی‌باسیل و سیتروباکتر (که معمولاً منفی هستند) و نیز برای شناسایی برخی از باکتری‌های خاک‌زی و لاکتوباسیل‌ها می‌باشد. این تست بخشی از مجموعه تست‌های شناسایی برای انتروباکتریاسه‌ها است.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث) افتراقی برای تست آنزیم گلوتامات دکربوکسیلاز
• هدف کشت: تشخیص تولید آنزیم گلوتامات دکربوکسیلاز توسط باکتری‌ها و تبدیل L-گلوتامات به گاما-آمینوبوتیریک اسید (GABA)
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده تا حل شود، سپس در لوله‌های کوچک تقسیم و استریل می‌شود). محیط مایع و شفاف است.
• ترکیبات کلیدی: L-گلوتامات مونوسدیم (سوبسترای اصلی)، پپتون (مقدار کم)، عصاره مخمر، نمک‌های معدنی، بنفش کریزول رد (Cresol Red) (شناساگر pH).
• شرایط کشت: لوله‌های حاوی ۳-۵ میلی‌لیتر محیط، با یک اینوکولوم سبک از کشت تازه باکتری (۱۸-۲۴ ساعته) تلقیح می‌شوند. سپس لوله‌ها با یک لایه حدود ۱۰ میلی‌متری از روغن معدنی استریل پوشانده می‌شوند تا شرایط بی‌هوازی (تنفس تخمیری) برای فعالیت بهینه آنزیم فراهم شود.
• شرایط انکوباسیون: دمای ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۴ تا ۴۸ ساعت (گاهی تا ۷۲ ساعت برای باکتری‌های کند رشد).
• خوانش نتیجه: مثبت (تولید گلوتامات دکربوکسیلاز): تغییر رنگ واضح محیط از زرد به بنفش/ارغوانی (در کل لوله یا در سطح). منفی: محیط زرد باقی می‌ماند یا ممکن است به رنگ نارنجی درآید (عدم تولید آمین قلیایی کافی).
• کنترل کیفیت: سویه مثبت: Enterobacter cloacae ATCC 23355 (تغییر رنگ به بنفش). سویه منفی: Escherichia coli ATCC 25922 (رنگ زرد باقی می‌ماند).
• کاربرد اصلی: کمک به شناسایی و افتراق باکتری‌ها در جنس‌های Enterobacter، Klebsiella، Citrobacter و برخی دیگر از انتروباکتریاسه‌ها و نیز در شناسایی برخی باکتری‌های غیرروده‌ای.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر DEV Glutamate Broth باید در جای خشک نگهداری شود. پس از تهیه، استریل‌سازی با اتوکلاو انجام می‌شود. پوشاندن لوله‌ها با روغن معدنی استریل بلافاصله پس از تلقیح، یک مرحله حیاتی برای ایجاد شرایط بی‌هوازی (میکروآئروفیلیک) است که فعالیت آنزیم دکربوکسیلاز را به شدت افزایش می‌دهد. خوانش رنگ باید در برابر یک زمینه سفید انجام شود. تغییر رنگ جزئی یا فقط در سطح ممکن است به عنوان مثبت ضعیف در نظر گرفته شود. برخی باکتری‌ها ممکن است از پپتون موجود استفاده کرده و محیط را کمی قلیایی کنند که می‌تواند با تغییر رنگ جزئی (به نارنجی-قرمز) همراه باشد؛ بنابراین تفسیر تغییر رنگ واضح به بنفش/ارغوانی کلیدی است. محیط آماده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد و دور از نور نگهداری کرد. محصول با کیفیت ایبرسکو (IBRESco)، با فرمولاسیون دقیق، نتایج واضح و قابل اعتمادی را برای این تست بیوشیمیایی تخصصی فراهم می‌کند.