محیط کشت DNase تست آگار

محیط کشت آگار تست DNase (DNase Test Agar)

محیط کشت DNase Test Agar یک محیط مبتنی بر پپتون و عصاره مخمر است که حاوی DNA (دئوکسی ریبونوکلئیک اسید) به عنوان سوبسترای آنزیم می‌باشد. باکتری‌هایی که آنزیم خارج سلولی دئوکسی ریبونوکلئاز (DNase) را تولید می‌کنند، DNA موجود در محیط را هیدرولیز کرده و آن را به الیگونوکلئوتیدها و دئوکسی ریبونوکلئوزیدها تجزیه می‌نمایند. پس از رشد باکتری، برای آشکارسازی نتیجه، اسید هیدروکلریک (HCl) 1N یا معرف تولوئیدین بلو بر روی سطح محیط ریخته می‌شود. HCl با DNA هیدرولیز نشده واکنش داده و آن را رسوب می‌دهد و باعث کدر شدن محیط می‌شود. در ناحیه‌ای که DNA توسط باکتری هیدرولیز شده است، این کدورت ایجاد نمی‌شود و یک هاله شفاف در اطراف ناحیه رشد باکتری پدیدار می‌گردد. در روش استفاده از تولوئیدین بلو، مناطق حاوی DNA هیدرولیز نشده به رنگ آبی درمی‌آیند، در حالی که مناطق هیدرولیز شده شفاف باقی می‌مانند.

کاربرد اصلی این محیط در آزمایشگاه‌های میکروبیولوژی تشخیصی برای افتراق Staphylococcus aureus (معمولاً DNase مثبت) از استافیلوکوک‌های کوآگولاز منفی (معمولاً DNase منفی) و نیز برای شناسایی برخی از باکتری‌های گرم منفی مانند Serratia، Moraxella و برخی گونه‌های Pseudomonas است.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: جامد (آگار) افتراقی برای تست فعالیت آنزیم دئوکسی ریبونوکلئاز (DNase)
• هدف کشت: تشخیص تولید آنزیم DNase توسط باکتری‌ها
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده تا حل شود، سپس اتوکلاو می‌شود. DNA معمولاً حساس به حرارت است و ممکن است جداگانه استریل شده و پس از اتوکلاو محیط پایه و سرد شدن آن اضافه گردد).
• ترکیبات کلیدی: تریپتون یا پپتون، عصاره مخمر، DNA (سوبسترای آنزیم)، سدیم کلرید، آگار.
• معرف‌های رایج برای آشکارسازی: اسید هیدروکلریک ۱ نرمال (1N HCl) یا محلول تولوئیدین بلو ۰.۱٪ (Toluidine Blue O).
• شرایط کشت: باکتری به صورت یک نقطه (Spot) ضخیم یا یک خط (Streak) بر روی سطح پلیت کشت داده می‌شود تا رشد متراکمی ایجاد شود.
• شرایط انکوباسیون: دمای ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۸ تا ۲۴ ساعت. برخی از باکتری‌ها ممکن است نیاز به انکوباسیون طولانی‌تر داشته باشند.
• خوانش نتیجه (با HCl): پس از انکوباسیون، سطح پلیت با حدود ۱ میلی‌لیتر از HCl 1N پوشانده می‌شود. پس از ۱ دقیقه، مایع اضافی تخلیه می‌گردد. مثبت: ایجاد یک هاله شفاف و واضح در اطراف ناحیه رشد باکتری. منفی: کل محیط به طور یکنواخت کدر (سفید شیری) می‌شود و هیچ هاله شفافی مشاهده نمی‌گردد.
• کنترل کیفیت: سویه مثبت: Staphylococcus aureus ATCC 25923 (هاله شفاف). سویه منفی: Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 (بدون هاله شفاف).
• کاربرد اصلی: تست افتراقی کلیدی در شناسایی استافیلوکوک‌ها و همچنین کمک به شناسایی برخی از باکتری‌های گرم منفی در آزمایشگاه تشخیصی.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر DNase Test Agar باید در جای خشک نگهداری شود. اگر DNA به صورت جداگانه اضافه می‌شود، باید با فیلتراسیون استریل شود تا از تخریب آن در اتوکلاو جلوگیری گردد. پلیت‌های آماده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد و دور از نور نگهداری کرد. قبل از استفاده، پلیت‌ها باید به دمای اتاق برسند. هنگام استفاده از HCl، باید دقت شود که به مقدار کافی روی سطح پلیت ریخته شود تا کاملاً پوشش دهد. خوانش نتیجه باید بلافاصله پس از تخلیه HCl انجام شود، زیرا هاله شفاف ممکن است با گذشت زمان محو شود. روش تولوئیدین بلو حساسیت بیشتری دارد و هاله صورتی-قرمز در اطراف کلنی‌های مثبت ایجاد می‌کند. تست DNase می‌تواند روی پلیت‌های حاوی متیل گرین (Methyl Green DNase Agar) نیز انجام شود که در آن هاله بیرنگ اطراف کلنی مثبت ظاهر می‌شود. محصول با کیفیت ایبرسکو (IBRESco)، با فرمولاسیون بهینه و DNA با کیفیت، واکنش‌های واضح و قابل اطمینانی را برای این تست تشخیصی مهم فراهم می‌کند.