محیط کشت DRCM مدیوم

محیط کشت مایع افتراقی کلستریدیا غنی‌شده (Differential Reinforced Clostridial Medium DRCM)

محیط کشت Differential Reinforced Clostridial Medium (DRCM) نسخه مایع محیط جامد DRCA است. این محیط بر پایه Reinforced Clostridial Medium (RCM) بسیار غنی‌شده (حاوی پپتون، عصاره گوشت، عصاره مخمر، نشاسته، گلوکز و سیستئین) بنا شده که رشد بهینه کلستریدیاها و بی‌هوازی‌های سخت‌پرور را تضمین می‌کند. برای ایجاد خاصیت افتراقی، سدیم سولفیت و یک نمک آهن (مانند سیترات فرو آمونیوم) به آن افزوده می‌شود. کلستریدیاهای احیاکننده سولفیت در طول رشد، سولفیت را به سولفید احیا می‌کنند. سولفید با یون آهن واکنش داده و سولفید آهن سیاه نامحلول تشکیل می‌دهد که به صورت رسوب یا سیاهی در کف لوله ظاهر می‌شود. برای افزایش انتخاب‌گری و مهار فلور همراه در نمونه‌های غذایی، اغلب آنتی‌بیوتیک د-سیکلوسرین به محیط اضافه می‌گردد.

کاربرد اصلی این محیط در میکروبیولوژی مواد غذایی به عنوان یک مرحله غنی‌سازی انتخابی در روش‌های استاندارد (مانند برخی ویرایش‌های استاندارد ISO برای Clostridium perfringens) برای افزایش حساسیت تشخیص در نمونه‌هایی با تعداد کم باکتری یا دارای فلور رقابتی زیاد است. همچنین در آزمایشگاه‌های تشخیصی برای کشت نمونه‌های مشکوک به کلستریدیوز کاربرد دارد.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث) بسیار غنی‌شده، انتخابی و افتراقی برای غنی‌سازی کلستریدیاهای احیاکننده سولفیت تحت شرایط بی‌هوازی
• هدف کشت: غنی‌سازی انتخابی و تشخیص اولیه کلستریدیاهای احیاکننده سولفیت (عمدتاً Clostridium perfringens) بر اساس تشکیل رسوب/سیاهی در محیط مایع
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده تا حل شود، سپس در لوله‌های مناسب تقسیم و اتوکلاو می‌شود. آنتی‌بیوتیک انتخابی پس از اتوکلاو اضافه می‌گردد). محیط مایع صاف است.
• ترکیبات کلیدی پایه (غنی‌ساز): پپتون، عصاره گوشت، عصاره مخمر، نشاسته، گلوکز، سیستئین هیدروکلراید (کاهنده).
• ترکیبات کلیدی افتراقی: سدیم سولفیت، سیترات فرو آمونیوم (یا منبع آهن مشابه).
• ترکیبات کلیدی انتخابی: د-سیکلوسرین (D-Cycloserine) (مهارکننده باکتری‌های غیرهدف، به ویژه در کاربردهای غذایی).
• شرایط کشت: نمونه (معمولاً ۱ گرم یا میلی‌لیتر) مستقیماً به لوله حاوی محیط اضافه می‌شود. لوله‌ها باید بلافاصله با درپوش محکم بسته شده و برای ایجاد شرایط بی‌هوازی، معمولاً به مدت کوتاهی در بن‌ماری جوشانده و سپس به سرعت خنک شوند (تا اکسیژن خارج شود) یا مستقیماً در یک سیستم بی‌هوازی قرار گیرند.
• شرایط انکوباسیون: دمای ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۸ تا ۲۴ ساعت (گاهی تا ۴۸ ساعت). انکوباسیون در شرایط بی‌هوازی (ژار بی‌هوازی یا انکوباتور بی‌هوازی) انجام می‌شود.
• خوانش نتیجه: مثبت (احیاکننده سولفیت): تشکیل رسوب سیاه مشخص در کف لوله. گاهی کل محیط به رنگ خاکستری-سیاه درمی‌آید. منفی: محیط شفاف یا کدر (بدون رسوب سیاه) باقی می‌ماند. کشت مثبت معمولاً برای تأیید و جداسازی خالص بر روی محیط جامد افتراقی (مانند DRCA یا TSC آگار) زیرکشت داده می‌شود.
• کنترل کیفیت: تشکیل رسوب سیاه واضح پس از انکوباسیون با سویه Clostridium perfringens ATCC 13124. عدم تشکیل رسوب سیاه با سویه‌های غیر احیاکننده.
• کاربرد اصلی: مرحله غنی‌سازی در روش‌های تشخیصی و استاندارد برای Clostridium perfringens در مواد غذایی، و نیز به عنوان محیط کشت تشخیصی اولیه در نمونه‌های بالینی مشکوک به کلستریدیوز.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر Differential Reinforced Clostridial Medium (DRCM) باید در جای خشک، خنک و دور از نور (به دلیل حساسیت سولفیت) نگهداری شود. پس از اتوکلاو و سرد شدن محیط، آنتی‌بیوتیک انتخابی استریل (د-سیکلوسرین) در شرایط آسپتیک اضافه می‌شود. ایجاد و حفظ شرایط بی‌هوازی در لوله‌های کشت برای موفقیت روش ضروری است. روش متداول “پخت و سریع سرد کردن” (heat-shock) برای حذف اکسیژن از محیط و نیز فعال کردن اسپورهای کلستریدیا اغلب استفاده می‌شود: لوله‌ها به مدت ۱۰ دقیقه در بن‌ماری جوشانده و سپس به سرعت در حمام آب سرد قرار داده می‌شوند. پس از انکوباسیون، لوله‌های مثبت (دارای رسوب سیاه) باید به محیط جامد افتراقی مناسب منتقل شوند. محصول با کیفیت ایبرسکو (IBRESco)، با فرمولاسیون دقیق و عملکرد تضمین‌شده، یک محیط غنی‌سازی قابل اعتماد برای افزایش حساسیت و صحت تشخیص این پاتوژن مهم بی‌هوازی فراهم می‌کند.