محیط کشت EC براث

محیط کشت انتخابی کلی‌فرم مدفوع ای‌سی (EC Broth)

محیط کشت EC Broth یک محیط لاکتوز براث است که حاوی تریپتوز (یا تریپتون)، لاکتوز، نمک‌های صفراوی (معمولاً مخلوطی از نمک‌ها) و سبز درخشان (Brilliant Green) می‌باشد. نمک‌های صفراوی و سبز درخشان به عنوان عوامل انتخابی عمل کرده و رشد باکتری‌های غیرهدف (گرم مثبت‌ها و بسیاری از گرم منفی‌های غیرکلی‌فرم) را مهار می‌کنند، در حالی که به کلی‌فرم‌های مدفوعی (مانند Escherichia coli، Klebsiella، Enterobacter) اجازه رشد می‌دهند. ویژگی تشخیصی اصلی، تخمیر لاکتوز با تولید گاز (CO₂ و H₂) در دمای بالا (۴۴.۵ ± ۰.۲ درجه سانتی‌گراد) است. این دمای بالا به طور انتخابی به E. coli و برخی دیگر از کلی‌فرم‌های مدفوعی اجازه تولید گاز می‌دهد، در حالی که بسیاری از کلی‌فرم‌های غیرمدفوعی در این دما قادر به تخمیر لاکتوز نیستند. تشکیل هر مقدار گاز در لوله دورهام کوچک معکوس داخل لوله کشت، نشانه مثبت بودن تست است.

کاربرد اصلی این محیط در آزمایشگاه‌های میکروبیولوژی آب و فاضلاب به عنوان مرحله تأییدی در روش استاندارد تخمیر چندلوله‌ای (MPN) برای تشخیص کلی‌فرم‌های مدفوعی و E. coli است. همچنین در کنترل کیفیت برخی مواد غذایی کاربرد دارد.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث) انتخابی برای تأیید کلی‌فرم‌های مدفوعی (فیکال کلی‌فرم)
• هدف کشت: تأیید حضور کلی‌فرم‌های مدفوعی بر اساس تولید گاز از لاکتوز در دمای ۴۴.۵ درجه سانتی‌گراد
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده تا حل شود، سپس در لوله‌های تخمیر حاوی لوله دورهام کوچک توزیع و اتوکلاو می‌شود). محیط مایع کهربایی-سبز رنگ است.
• ترکیبات کلیدی: تریپتوز یا تریپتون، لاکتوز، نمک‌های صفراوی، سبز درخشان (Brilliant Green)، فسفات پتاسیم (بافر).
• شرایط کشت: از کشت مثبت مرحله احتمالی (Presumptive) که در محیط لاکتوز براث در دمای ۳۵ درجه سانتی‌گراد گاز تولید کرده، یک اینوکولوم (معمولاً یک لوپ یا ۰.۱ میلی‌لیتر) به لوله‌های EC Broth منتقل می‌شود.
• شرایط انکوباسیون: دمای ۴۴.۵ ± ۰.۲ درجه سانتی‌گراد در یک حمام آب دقیقاً کنترل‌شده به مدت ۲۴ ± ۲ ساعت. انکوباسیون در این دمای بالا ویژگی کلی‌فرم مدفوعی را مشخص می‌کند.
• خوانش نتیجه: مثبت: تشکیل حباب گاز (هر مقدار) در لوله دورهام کوچک. منفی: عدم تشکیل گاز (لوله دورهام پر از مایع باقی می‌ماند). رشد باکتری (کدورت) بدون تولید گاز نیز نتیجه منفی محسوب می‌شود.
• کنترل کیفیت: سویه مثبت: Escherichia coli ATCC 25922 (تولید گاز در ۴۴.۵ درجه). سویه منفی: Enterobacter aerogenes ATCC 13048 (معمولاً در ۴۴.۵ درجه تولید گاز نمی‌کند یا تولید آن ضعیف است).
• کاربرد اصلی: مرحله تأییدی در روش استاندارد تخمیر چندلوله‌ای (MPN) برای تشخیص کلی‌فرم‌های مدفوعی و E. coli در آب آشامیدنی، آب‌های سطحی، فاضلاب و برخی مواد غذایی (مطابق با استانداردهای APHA، ISO).

نکات کاربردی و نگهداری

پودر EC Broth باید در جای خشک نگهداری شود. آماده‌سازی شامل حل کردن در آب مقطر، توزیع در لوله‌های تخمیر حاوی لوله دورهام کوچک و استریل‌سازی با اتوکلاو است. لوله دورهام باید کاملاً پر از محیط بوده و حباب هوایی نداشته باشد. کنترل دقیق و یکنواخت دمای انکوباسیون در محدوده ۴۴.۵ درجه سانتی‌گراد (معمولاً با استفاده از حمام آب هم‌زن‌دار) برای نتایج معتبر و قابل تکرار ضروری است. لوله‌ها باید طوری در حمام آب قرار گیرند که سطح محیط داخل آنها زیر سطح آب باشد. حجم اینوکولوم ورودی باید کم (معمولاً یک لوپ) باشد تا از رقیق شدن بیش از حد محیط و کاهش اثر مهارکننده‌ها جلوگیری شود. نتایج معمولاً پس از ۲۴ ساعت خوانده می‌شوند. لوله‌های مثبت EC Broth ممکن است برای آزمون‌های تأییدی نهایی بیشتر (مانند کشت بر روی آگار EMB یا تست IMViC) مورد استفاده قرار گیرند. محصول با کیفیت ایبرسکو (IBRESco)، با فرمولاسیون استاندارد و انتخاب‌گری اثبات‌شده، یک محیط تأییدی قابل اعتماد و ضروری برای برنامه‌های پایش کیفیت آب و ایمنی مواد غذایی فراهم می‌کند.