محیط کشت EC مدیوم

محیط کشت انتخابی کلی‌فرم مدفوع ای‌سی (EC Medium Modified)

محیط کشت EC Medium (Modified) یک محیط لاکتوز براث است که با افزودن نمک‌های صفراوی یا مواد مشابه (مانند دزوکسی کولات) و یک عامل مهارکننده (مانند سبز درخشان) به یک محیط انتخابی برای کلی‌فرم‌های مدفوعی تبدیل شده است. نمک‌های صفراوی رشد باکتری‌های گرم مثبت و بسیاری از گرم منفی‌های غیرروده‌ای را مهار می‌کنند. سبز درخشان (Brilliant Green) نیز به عنوان یک مهارکننده اضافی برای باکتری‌های غیرهدف عمل می‌کند. کلی‌فرم‌های مدفوعی (که عمدتاً E. coli و برخی از Klebsiella و Enterobacter هستند) قادر به تخمیر لاکتوز با تولید گاز (عمدتاً CO₂ و H₂) در دمای ۴۴.۵ تا ۴۵.۵ درجه سانتی‌گراد (دمای بالای انکوباسیون) می‌باشند. تشکیل گاز در لوله Durham کوچک معکوس درون لوله کشت، نشانه مثبت بودن تست است. این تست بخشی از روش چندمرحله‌ای استاندارد برای تشخیص E. coli در آب است.

کاربرد اصلی این محیط در آزمایشگاه‌های کنترل کیفیت آب و فاضلاب (به عنوان بخشی از تست‌های تأییدی در روش تخمیر چندلوله‌ای (MPN)) و نیز در صنایع غذایی برای تشخیص آلودگی مدفوعی است.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث) انتخابی برای تأیید کلی‌فرم‌های مدفوعی (فیکال کلی‌فرم)
• هدف کشت: تأیید حضور کلی‌فرم‌های مدفوعی بر اساس تولید گاز از لاکتوز در دمای ۴۴.۵-۴۵.۵ درجه سانتی‌گراد
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده تا حل شود، سپس در لوله‌های حاوی لوله دورهام کوچک توزیع و استریل می‌شود). محیط مایع کهربایی-سبز روشن است.
• ترکیبات کلیدی: تریپتون یا پپتون، لاکتوز (سوبسترای تخمیر)، نمک‌های صفراوی یا دزوکسی کولات (عامل انتخابی)، سبز درخشان (Brilliant Green) (مهارکننده)، فسفات‌ها (بافر).
• شرایط کشت: از کشت مثبت مرحله قبل (معمولاً از محیط لاکتوز براث تخمیر مثبت در دمای ۳۵ درجه) به لوله‌های EC Medium منتقل می‌شود. انتقال باید به مقدار کم (معمولاً یک لوپ یا ۰.۱ میلی‌لیتر) انجام گیرد.
• شرایط انکوباسیون: دمای ۴۴.۵ تا ۴۵.۵ درجه سانتی‌گراد در حمام آب دقیقاً کنترل‌شده یا انکوباتور پرتابل به مدت ۲۴ ± ۲ ساعت. انکوباسیون در دمای بالا، ویژگی کلی‌فرم مدفوعی (عمدتاً E. coli) را از سایر کلی‌فرم‌ها متمایز می‌کند.
• خوانش نتیجه: مثبت (کلی‌فرم مدفوعی): تشکیل حباب گاز (هر مقدار) در لوله دورهام کوچک. منفی: عدم تشکیل گاز (لوله دورهام پر از مایع باقی می‌ماند). محیط ممکن است کدر شود (رشد) ولی بدون گاز منفی است.
• کنترل کیفیت: سویه مثبت: Escherichia coli ATCC 25922 (تولید گاز در دمای ۴۴.۵ درجه). سویه منفی: Klebsiella pneumoniae ATCC 13883 (معمولاً در دمای ۴۴.۵ گاز تولید نمی‌کند یا تولید ضعیفی دارد).
• کاربرد اصلی: مرحله تأییدی در روش استاندارد تخمیر چندلوله‌ای (MPN) برای تشخیص کلی‌فرم‌های مدفوعی و E. coli در آب آشامیدنی، آب‌های سطحی و فاضلاب (مطابق با استانداردهای APHA، ISO).

نکات کاربردی و نگهداری

پودر EC Medium (Modified) باید در جای خشک نگهداری شود. آماده‌سازی شامل حل کردن در آب مقطر، توزیع در لوله‌های تخمیر حاوی لوله دورهام کوچک و استریل‌سازی با اتوکلاو است. کنترل دقیق دمای انکوباسیون در محدوده ۴۴.۵ تا ۴۵.۵ درجه سانتی‌گراد برای نتایج قابل اعتماد حیاتی است. توصیه می‌شود از حمام آب هم‌زن‌دار با کنترل دقیق دما استفاده شود. لوله‌ها باید به خوبی در آب غوطه‌ور شوند. حجم اینوکولوم نباید زیاد باشد زیرا ممکن است باعث رقیق‌ شدن مهارکننده‌ها شود. نتایج باید پس از ۲۴ ساعت خوانده شوند، اگرچه برخی روش‌ها خوانش در ۴۸ ساعت را نیز مجاز می‌دانند. لوله‌های مثبت معمولاً برای آزمون‌های تأییدی نهایی (مانند تست IMViC برای E. coli) استفاده می‌شوند. محصول با کیفیت ایبرسکو (IBRESco)، با فرمولاسیون اصلاح‌شده و انتخاب‌گری بهینه، یک محیط تأییدی قابل اعتماد برای تشخیص این شاخص مهم آلودگی آب فراهم می‌کند.