محیط کشت EE براث

محیط کشت غنی‌سازی انتروباکتریاسه موسِل (EE Broth)

محیط کشت EE Broth (Mossel) یک محیط غنی‌سازی مبتنی بر پپتون و گلوکز است که حاوی نمک‌های صفراوی و سبز درخشان (Brilliant Green) به عنوان عوامل انتخابی می‌باشد. نمک‌های صفراوی رشد بسیاری از باکتری‌های گرم مثبت را مهار می‌کنند. سبز درخشان نیز به مهار باکتری‌های گرم مثبت و به ویژه باکتری‌های جنس Pseudomonas (که اغلب در مواد غذایی فاسد شده یافت می‌شوند و می‌توانند با انتروباکتریاسه‌ها رقابت کنند) کمک شایانی می‌نماید. در عین حال، غلظت این مهارکننده‌ها به اندازه‌ای تنظیم شده است که به طیف وسیعی از انتروباکتریاسه‌ها (اعم از پاتوژن و غیرپاتوژن) اجازه رشد و تکثیر بدهد. این محیط اغلب به عنوان مرحله اولیه غنی‌سازی غیرانتخابی‌تر قبل از استفاده از محیط‌های انتخابی بسیار قوی (مانند سلنیت سیستین براث برای سالمونلا) به کار می‌رود تا از بازیابی انتروباکتریاسه‌های آسیب‌دیده اطمینان حاصل شود.

کاربرد اصلی این محیط در میکروبیولوژی مواد غذایی و دامپزشکی برای افزایش حساسیت روش‌های جداسازی انتروباکتریاسه‌های خاص (مانند سالمونلا، شیگلا، یرسینیا) از نمونه‌های پیچیده مانند گوشت، شیر، تخم مرغ، سبزیجات و خوراک دام است. این محیط بخشی از برخی پروتکل‌های استاندارد (مانند ISO) برای تشخیص این پاتوژن‌ها می‌باشد.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث) انتخابی برای غنی‌سازی انتروباکتریاسه‌ها
• هدف کشت: غنی‌سازی اولیه و تکثیر انتخابی باکتری‌های خانواده انتروباکتریاسه از نمونه‌های دارای فلور میکروبی مختلط
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده تا حل شود و سپس اتوکلاو). محیط مایع و کهربایی-سبز رنگ است.
• ترکیبات کلیدی: پپتون، گلوکز (منبع کربن)، نمک‌های صفراوی، سبز درخشان (Brilliant Green)، فسفات‌های سدیم و پتاسیم (بافر).
• شرایط کشت: نمونه (معمولاً ۱۰ گرم یا میلی‌لیتر) به یک ظرف حاوی حجم مشخصی از محیط (معمولاً ۹۰ میلی‌لیتر برای رقت ۱:۱۰) اضافه و به خوبی مخلوط می‌شود.
• شرایط انکوباسیون: دمای ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۸ تا ۲۴ ساعت. گاهی انکوباسیون اولیه در دمای پایین‌تر (مثلاً ۲۵ درجه) برای بازیابی سلول‌های آسیب‌دیده توصیه می‌شود.
• خوانش نتیجه: رشد باکتری با ایجاد کدورت (Turbidity) در محیط مشخص می‌شود. نتیجه نهایی رشد در این مرحله نیست، بلکه ادامه فرآیند است: پس از دوره انکوباسیون، از این کشت برای تلقیح محیط‌های انتخابی-افتراقی جامد (مانند XLD آگار، هکتون انتریک آگار) یا محیط‌های غنی‌سازی ثانویه بسیار انتخابی‌تر (مانند سلنیت سیستین براث برای سالمونلا) استفاده می‌شود.
• کنترل کیفیت: رشد خوب و ایجاد کدورت با سویه‌های انتروباکتریاسه مانند Escherichia coli ATCC 25922. مهار نسبی یا عدم رشد با سویه Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 و برخی باکتری‌های گرم مثبت مانند Staphylococcus aureus.
• کاربرد اصلی: مرحله اول غنی‌سازی در روش‌های استاندارد جداسازی سالمونلا، شیگلا و برخی دیگر از انتروباکتریاسه‌های پاتوژن از مواد غذایی، خوراک دام و نمونه‌های محیطی.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر EE Broth (Mossel) باید در جای خشک و دور از نور (به دلیل حساسیت سبز درخشان) نگهداری شود. آماده‌سازی ساده است و پس از اتوکلاو، محیط آماده مصرف می‌باشد. نسبت نمونه به محیط باید مطابق با دستورالعمل استاندارد باشد. این محیط یک محیط غنی‌سازی انتخابی است و نه یک محیط تشخیصی؛ بنابراین همیشه باید با کشت بر روی محیط جامد مناسب دنبال شود. برخی از سویه‌های حساس انتروباکتریاسه (به ویژه سالمونلاهای آسیب‌دیده) ممکن است به غلظت سبز درخشان حساس باشند، بنابراین رعایت دقیق فرمولاسیون مهم است. برای برخی کاربردهای خاص (مانند جداسازی Yersinia enterocolitica)، ممکن است انکوباسیون در دمای پایین‌تر (۲۲-۲۵ درجه سانتی‌گراد) ترجیح داده شود. محصول با کیفیت ایبرسکو (IBRESco)، با فرمولاسیون متعادل مطابق با روش موسِل، یک محیط غنی‌سازی قابل اعتماد برای بهبود بازیابی انتروباکتریاسه‌های مهم از نمونه‌های پیچیده فراهم می‌کند.