محیط کشت EMB آگار لوین

محیط کشت انتخابی و افتراقی ائوزین متیلن بلو آگار (EMB Agar Levine)

محیط کشت EMB Agar (Levine) دو عملکرد انتخابی و افتراقی را با هم ادغام می‌کند. ائوزین Y و متیلن بلو نه تنها به عنوان شناساگر عمل می‌کنند، بلکه خاصیت انتخابی دارند و رشد باکتری‌های گرم مثبت را مهار می‌نمایند. لاکتوز تنها منبع کربوهیدرات در محیط است. کلی‌فرم‌های تخمیرکننده لاکتوز (مانند E. coli) اسید تولید می‌کنند. کاهش pH باعث جذب ائوزین و متیلن بلو توسط سلول‌های باکتری شده و به کلنی‌ها رنگ می‌دهد. میزان تولید اسید و ویژگی‌های متابولیک گونه‌های مختلف، رنگ و ظاهر متفاوتی ایجاد می‌کند: E. coli که اسید زیادی تولید می‌کند، کلنی‌های کوچک، تیره و با مرکز سیاه و اغلب دارای درخشش سبز فلزی (Metallic Sheen) تشکیل می‌دهد. کلی‌فرم‌های دیگر مانند Enterobacter یا Klebsiella که اسید کمتری تولید می‌کنند، کلنی‌های صورتی، بنفش یا قهوه‌ای (اغلب موکوئید) بدون درخشش فلزی ایجاد می‌نمایند. باکتری‌های غیرتخمیرکننده لاکتوز (مانند Salmonella، Shigella، Pseudomonas) کلنی‌های بی‌رنگ یا شفاف تولید می‌کنند.

کاربرد اصلی این محیط در آزمایشگاه‌های میکروبیولوژی تشخیصی و کنترل کیفیت به عنوان یک محیط افتراقی اولیه برای تشخیص E. coli و سایر انتروباکتریاسه‌ها از نمونه‌های ادرار، مدفوع، مواد غذایی و آب است.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: جامد (آگار) انتخابی و افتراقی برای کلی‌فرم‌ها و انتروباکتریاسه‌ها
• هدف کشت: جداسازی و افتراق کلی‌فرم‌های تخمیرکننده لاکتوز از غیرتخمیرکننده‌ها و شناسایی اولیه E. coli بر اساس مورفولوژی کلنی و درخشش فلزی
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده تا حل شود، سپس به مدت ۱ دقیقه جوشانده (و نه اتوکلاو) تا از تجزیه رنگ‌ها جلوگیری شود. پس از خنک شدن، در پلیت ریخته می‌شود). محیط نهایی بنفش تیره تا تقریباً سیاه است.
• ترکیبات کلیدی: پپتون، لاکتوز، ائوزین Y، متیلن بلو، آگار.
• شرایط کشت: کشت سطحی (Streak برای جداسازی) یا روش Spread Plate/Pour Plate برای شمارش.
• شرایط انکوباسیون: دمای ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۸ تا ۲۴ ساعت.
• خوانش نتیجه: Escherichia coli: کلنی‌های کوچک، تیره (سیاه-بنفش) با درخشش سبز فلزی (Metallic Sheen). کلی‌فرم‌های دیگر (Enterobacter/Klebsiella): کلنی‌های صورتی-بنفش، موکوئید، اغلب بزرگ‌تر و بدون درخشش فلزی. غیرتخمیرکننده‌های لاکتوز (Salmonella, Shigella, Pseudomonas): کلنی‌های شفاف، بی‌رنگ یا صورتی بسیار کم‌رنگ (گاهی با مرکز تیره). باکتری‌های گرم مثبت: معمولاً مهار شده یا رشد بسیار ضعیف دارند.
• کنترل کیفیت: سویه مثبت با درخشش فلزی: Escherichia coli ATCC 25922. سویه مثبت بدون درخشش فلزی: Enterobacter aerogenes ATCC 13048. سویه منفی (غیرتخمیرکننده): Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853.
• کاربرد اصلی: محیط افتراقی استاندارد در آزمایشگاه تشخیصی برای نمونه‌های ادرار و مدفوع، و نیز در کنترل کیفیت آب و غذا.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر EMB Agar (Levine) باید در جای خشک و تاریک نگهداری شود. نکته حیاتی در آماده‌سازی: محیط باید به مدت ۱ دقیقه جوشانده شود (طبق دستور اغلب سازندگان) تا کاملاً حل شود، اما نباید اتوکلاو گردد زیرا حرارت مرطوب شدید باعث تجزیه ائوزین و متیلن بلو و از دست رفتن عملکرد انتخابی و افتراقی آن می‌شود. پس از جوشاندن، محیط را در بن‌ماری ۴۵-۵۰ درجه سانتی‌گراد نگه داشته و بلافاصله در پلیت بریزید. پلیت‌های آماده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد و در تاریکی برای چند روز نگهداری کرد. قبل از استفاده، پلیت‌ها باید به دمای اتاق برسند. درخشش فلزی سبز یک ویژگی تشخیصی ارزشمند برای E. coli است، اما همه سویه‌ها آن را نشان نمی‌دهند. تفسیر رنگ کلنی‌ها باید در نور مناسب انجام شود. محیط ایبرسکو (IBRESco) با فرمولاسیون دقیق، تضمین می‌کند که این محیط کلاسیک عملکرد انتخابی و افتراقی واضح و قابل اعتمادی داشته باشد.