محیط کشت GN براث هاینا 2

محیط کشت براث جی‌ان هاجنا (GN Broth)

محیط کشت GN Broth Hajna (مخفف Gram-Negative Broth) یک محیط غنی‌کننده انتخابی است که برای مرحله پیش‌غنی‌سازی (Pre-enrichment) یا غنی‌سازی مستقیم نمونه‌ها قبل از کشت روی محیط‌های انتخابی جامد (مانند SS Agar، XLD Agar یا Hektoen Enteric Agar) استفاده می‌شود. اساس انتخاب‌پذیری این محیط، حضور دزوکسیکولات سدیم و سیترات سدیم به عنوان عوامل انتخابی است که رشد بسیاری از باکتری‌های گرم‌مثبت و گرم‌منفی روده‌ای غیربیماری‌زا (مانند E. coli معمولی) را مهار می‌کنند، در حالی که به سالمونلا و شیگلا اجازه رشد می‌دهند. محیط همچنین حاوی منابع تغذیه‌ای متنوع (مانند پپتون و گلوکز) و بافرهای فسفات است که pH را در محدوده بهینه حفظ کرده و از استرس اسیدی ناشی از تخمیر جلوگیری می‌نماید. این ویژگی‌ها، GN Broth را به یک محیط غنی‌کننده غیرمهارکننده انتخابی (Selective Non-Inhibitory) تبدیل می‌کند که برای احیای سلول‌های آسیب‌دیده (مثلاً در اثر حرارت، خشکی یا اسید) سالمونلا و شیگلا ایده‌آل است.

کاربرد اصلی این محیط در آزمایشگاه‌های میکروبیولوژی غذایی و بالینی، مطابق با استانداردهایی مانند FDA/BAM، برای جداسازی سالمونلا و شیگلا از نمونه‌های پیچیده (مانند مدفوع، غذاهای فرآوری شده، محصولات کشاورزی) است. استفاده از آن حساسیت روش کشت را به طور قابل توجهی افزایش می‌دهد.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث)، انتخابی و غنی‌کننده برای باکتری‌های گرم‌منفی روده‌ای بیماری‌زا
• هدف کشت: غنی‌سازی و بهبود بازیابی سالمونلا و شیگلا از نمونه‌های بالینی، غذایی و محیطی
• حالت فیزیکی: پودر (حاوی پپتون، گلوکز، سیترات، دزوکسیکولات و نمک‌های بافری) که پس از حل کردن در آب مقطر و اتوکلاو، در لوله یا ظرف استریل توزیع می‌شود.
• ترکیبات کلیدی: پپتون، گلوکز، سدیم سیترات، دزوکسیکولات سدیم، دی‌پتاسیم فسفات، مونوپتاسیم فسفات، کلرید سدیم
• عوامل انتخابی: دزوکسیکولات سدیم (مهارکننده انتخابی) و سیترات سدیم (بافر و کمک به انتخاب‌پذیری)
• اصول عملکرد: عوامل انتخابی، رشد فلور معمولی روده را مهار می‌کنند. گلوکز به عنوان منبع کربن سریع، رشد اولیه پاتوژن‌ها را تقویت می‌کند. سیستم بافر فسفاتی از افت شدید pH (در صورت تخمیر گلوکز توسط باکتری‌های باقی‌مانده) جلوگیری کرده و شرایط را برای رشد سالمونلا و شیگلا که تخمیر‌کننده‌های ضعیف‌تری هستند، مساعد می‌سازد.
• شرایط کشت: نمونه (مثلاً ۱ گرم یا ۱ میلی‌لیتر) مستقیماً به حجم معینی از محیط (معمولاً ۱۰ میلی‌لیتر) اضافه و به خوبی مخلوط می‌شود.
• شرایط انکوباسیون: ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۶ تا ۸ ساعت (برای غنی‌سازی کوتاه‌مدت) و گاهی تا ۱۸-۲۴ ساعت (برای نمونه‌های با شمارش میکروبی پایین یا سلول‌های آسیب‌دیده).
• خوانش نتیجه: محیط فاقد نشانگر رنگی است. رشد به صورت کدورت مشاهده می‌شود، اما وجود کدورت به معنای حضور پاتوژن نیست. پس از دوره انکوباسیون، یک لوپ از کشت روی محیط‌های جامد انتخابی (مانند XLD یا HE) کشت داده می‌شود تا کلونی‌های مشکوک جدا شوند.
• کنترل کیفیت: سویه Salmonella enterica subsp. enterica serovar Typhimurium ATCC 14028: رشد خوب پس از ۶-۸ ساعت. سویه Escherichia coli ATCC 25922: رشد مهارشده یا بسیار ضعیف.
• کاربرد اصلی: محیط استاندارد برای غنی‌سازی انتخابی کوتاه‌مدت و بلندمدت سالمونلا و شیگلا در روش‌های تشخیصی میکروبیولوژی.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر محیط GN Broth Hajna ایبرسکو (IBRESco) را در جای خشک و خنک نگهداری کنید. از آب مقطر با کیفیت بالا برای تهیه محیط استفاده شود. محیط آماده شده باید شفاف باشد. پس از اتوکلاو، محیط را می‌توان در دمای اتاق یا در یخچال (۲-۸ درجه سانتی‌گراد) نگهداری کرد. قبل از استفاده، محیط باید به دمای اتاق رسیده باشد. حجم توصیه شده محیط برای هر نمونه معمولاً ۱۰ میلی‌لیتر است. دوره انکوباسیون بحرانی است: انکوباسیون بیش از ۸-۱۲ ساعت ممکن است به باکتری‌های غیرهدف (مانند پروتئوس) اجازه رشد دهد و تشخیص را مختل کند. بنابراین، کشت‌گذاری روی محیط جامد انتخابی باید پس از ۶-۸ ساعت انجام شود. اگر نمونه حاوی تعداد بسیار کمی سلول باشد، می‌توان انکوباسیون را تا ۱۸-۲۴ ساعت ادامه داد، اما خطر رشد فلور همراه افزایش می‌یابد. نمونه‌های جامد باید به خوبی در محیط پخش شوند. GN Broth برای غنی‌سازی مستقیم نمونه‌های مدفوع تازه یا نمونه‌های غذایی غنی از چربی (که ممکن است با دزوکسیکولات رسوب تشکیل دهند) نیز مناسب است، اما در صورت تشکیل رسوب، باید قبل از کشت، قسمت بالایی مایع را برداشت. این محیط برای غنی‌سازی کمپیلوباکتر یا یرسینیا مناسب نیست. کلیه کشت‌های مشکوک به سالمونلا و شیگلا باید با احتیاط و تحت شرایط ایمنی زیستی مناسب انجام شوند.