محیط کشت MYP آگار

محیط کشت آگار مانیتول زرده تخم مرغ پلی‌میکسین (MYP Agar)

محیط کشت MYP Agar یک محیط انتخابی-تشخیصی است که بر اساس ویژگی‌های بیوشیمیایی و آنزیمی Bacillus cereus عمل می‌کند. این محیط حاوی مانیتول به عنوان تنها منبع کربوهیدرات است. B. cereus قادر به تخمیر مانیتول نیست، در حالی که بسیاری از باکتری‌های رقیب (مانند بیشتر استافیلوکوک‌ها) آن را تخمیر می‌کنند. عدم تخمیر مانیتول توسط B. cereus منجر به قلیایی ماندن محیط و حفظ رنگ قرمز فنول می‌شود. بنابراین کلونی‌های B. cereus روی محیطی با پس‌زمینه قرمز-بنفش رشد می‌کنند. جزء تشخیصی دیگر، زرده تخم مرغ است که حاوی لسیتین است. B. cereus آنزیم لسیتیناز (فسفولیپاز C) تولید می‌کند که لسیتین را هیدرولیز کرده و باعث تشکیل یک هاله شفاف (Precipitate) در اطراف کلونی می‌شود. عامل انتخابی اصلی، پلی‌میکسین B است که رشد اغلب باکتری‌های گرم‌منفی و بسیاری از گرم‌مثبت‌ها را مهار می‌کند، اما B. cereus نسبت به آن مقاوم است.

کاربرد اصلی این محیط در آزمایشگاه‌های کنترل کیفیت مواد غذایی مطابق با استانداردهای ISO 7932 و FDA/BAM برای شمارش انتخابی Bacillus cereus در غذاهایی مانند برنج، شیر، ادویه‌جات، محصولات لبنی و خشک شده است.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: جامد (آگار)، انتخابی-تشخیصی برای باسیلوس سرئوس
• هدف کشت: جداسازی، شمارش و شناسایی اولیه Bacillus cereus از نمونه‌های غذایی
• حالت فیزیکی: پودر (حاوی پپتون، مانیتول، زرده تخم مرغ خشک شده، قرمز فنول، پلی‌میکسین B و آگار) که پس از حل کردن و اتوکلاو، در پلیت ریخته می‌شود.
• ترکیبات کلیدی: پپتون، مانیتول، زرده تخم مرغ (به صورت پودر یا امولسیون)، پلی‌میکسین B، قرمز فنول، آگار
• اصول آزمون: تشخیص: عدم تخمیر مانیتول (کلونی‌های قرمز-بنفش روی محیط قرمز) و تولید لسیتیناز (هاله شفاف اطراف کلونی). انتخاب: مهار باکتری‌های رقیب توسط پلی‌میکسین B.
• شرایط کشت: نمونه غذایی پس از تهیه سوسپانسیون و رقت‌سازی، به روش spread plate یا pour plate روی محیط کشت داده می‌شود.
• شرایط انکوباسیون: ۳۰ تا ۳۵ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۸ تا ۲۴ ساعت. برای مشاهده کامل هاله لسیتیناز ممکن است تا ۴۸ ساعت انکوبه شود.
• خوانش نتیجه: مثبت برای باسیلوس سرئوس (احتمالی): کلونی‌های صورتی تا قرمز-بنفش با هاله شفاف واضح در اطراف آنها (ناشی از فعالیت لسیتیناز). منفی: کلونی‌های زرد (تخمیرکننده مانیتول) یا فاقد هاله شفاف.
• کنترل کیفیت: سویه Bacillus cereus ATCC 11778: رشد خوب با کلونی‌های صورتی و هاله شفاف. سویه Staphylococcus aureus ATCC 25923: مهار رشد یا کلونی‌های زرد (تخمیر مانیتول) بدون هاله شفاف.
• کاربرد اصلی: روش استاندارد طلایی برای شمارش و تشخیص انتخابی Bacillus cereus در میکروبیولوژی غذایی.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر محیط MYP Agar ایبرسکو (IBRESco) را در جای خشک و خنک (ترجیحاً زیر ۸ درجه سانتی‌گراد) و دور از نور نگهداری کنید. از آنجایی که حاوی پلی‌میکسین B (حساس به حرارت) است، نباید محیط را پس از اضافه کردن پودر، اتوکلاو کرد. معمولاً محیط پایه (بدون آنتی‌بیوتیک) اتوکلاو شده و پس از خنک شدن به ۴۵-۵۰ درجه سانتی‌گراد، پلی‌میکسین B استریل فیلتر شده به آن اضافه می‌گردد. زرده تخم مرغ نیز معمولاً به صورت محلول استریل جداگانه اضافه می‌شود. محیط را به آرامی مخلوط کرده و بلافاصله در پلیت بریزید تا از توزیع یکنواخت زرده اطمینان حاصل شود. پلیت‌های آماده را می‌توان در کیسه‌های پلاستیکی بسته‌بندی و در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد و دور از نور برای مدت محدود (معمولاً ۱ هفته) نگهداری کرد. قبل از استفاده، پلیت‌ها باید به دمای اتاق رسیده و سطح آنها خشک باشد. تفسیر هاله شفاف باید تحت نور مناسب و در برابر یک پس‌زمینه تیره انجام شود. کلونی‌های مشکوک باید برای تأیید نهایی (تست حرکتی، تشکیل کریستال توکسین، تست هایمولیز) زیرکشت داده شوند. توجه داشته باشید که برخی گونه‌های نزدیک به B. cereus (مانند B. thuringiensis یا B. mycoides) نیز ممکن است واکنش مشابهی نشان دهند. برای نمونه‌های با بار میکروبی بالا، رقت‌های مناسب تهیه شود.