محیط کشت OF گلوکز مدیوم

محیط کشت گلوکز او اف (OF Glucose Medium)

محیط کشت OF Glucose Medium در واقع محیط OF Basal Medium است که از قبل با گلوکز (معمولاً با غلظت ۱٪) غنی شده است. این محیط مایع نیمه‌جامد حاوی پپتون، نمک‌ها، نشانگر pH (بروموتیمول بلو) و مقدار کمی آگار (۰.۲٪) برای کاهش همرفت و حفظ شرایط ردوکس می‌باشد. حضور گلوکز به عنوان سوبسترای اصلی، امکان ارزیابی توانایی باکتری در متابولیزه کردن این قند را در دو شرایط اتمسفری فراهم می‌کند. برای انجام تست، دو لوله از این محیط تلقیح می‌شوند. روی یکی از لوله‌ها یک لایه ضخیم (۱ سانتی‌متر) از روغن پارافین استریل ریخته می‌شود تا شرایط بیهوازی (Fermentative) ایجاد کند. لوله دیگر در معرض هوا (Oxidative) باقی می‌ماند. تولید اسید ناشی از متابولیسم گلوکز باعث تغییر رنگ نشانگر از سبز به زرد می‌شود. تفسیر الگوی تغییر رنگ در دو لوله، وضعیت متابولیکی باکتری را مشخص می‌نماید: تخمیرگر (اسید در هر دو لوله)، اکسیداتیو (اسید تنها در لوله هوازی) و غیرمصرف‌کننده (عدم تولید اسید در هر دو لوله).

کاربرد اصلی و اولین گام در شناسایی باکتری‌های گرم‌منفی غیرانتروباکتریاسه، انجام تست OF گلوکز است. این تست به سرعت باکتری‌های غیرتخمیرگر (که اغلب در عفونت‌های فرصت‌طلب نقش دارند) را از انتروباکتریاسه‌های شایع جدا می‌کند.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع نیمه‌جامد (حاوی آگار کم)، تشخیصی برای تست متابولیسم گلوکز
• هدف کشت: افتراق اولیه باکتری‌های گرم‌منفی بر اساس الگوی مصرف گلوکز: تخمیرگر (F)، اکسیداتیو (O) یا غیرمصرف‌کننده (N)
• حالت فیزیکی: پودر (حاوی پپتون، گلوکز، نمک‌ها، بروموتیمول بلو و آگار) که پس از حل کردن در آب مقطر، در لوله‌ها توزیع و اتوکلاو می‌شود.
• ترکیبات کلیدی: پپتون، گلوکز، کلرید سدیم، دی‌پتاسیم فسفات، بروموتیمول بلو، آگار (۰.۲٪)
• اصول آزمون: ارزیابی تولید اسید از گلوکز در شرایط هوازی و بیهوازی (ایجاد شده با روغن پارافین). تغییر رنگ به زرد نشانه مثبت است.
• شرایط کشت: دو لوله محیط با یک روش (ترجیحاً سوزن کشت مستقیم عمقی) تلقیح می‌شوند. روی یک لوله بلافاصله روغن پارافین استریل اضافه می‌گردد.
• شرایط انکوباسیون: ۳۵ تا ۳۷ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۸ تا ۴۸ ساعت (گاهی بررسی تا ۷ روز برای باکتری‌های کند). لوله‌ها باید ایستاده انکوبه شوند.
• خوانش نتیجه: تخمیر (F): هر دو لوله (با روغن و بدون روغن) زرد رنگ شوند. اکسیداتیو (O): فقط لوله بدون روغن (هوازی) زرد شود. غیرمصرف‌کننده (N): هر دو لوله سبز باقی بمانند یا قلیایی (آبی) شوند. گاهی واکنش ضعیف (زرد شدن خفیف فقط در قسمت فوقانی لوله هوازی) دیده می‌شود.
• کنترل کیفیت: سویه Escherichia coli ATCC 25922 (تخمیرگر): هر دو لوله زرد (F). سویه Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 (اکسیداتیو): فقط لوله هوازی زرد (O). سویه Alcaligenes faecalis ATCC 35554 (غیرمصرف‌کننده): هر دو لوله سبز/آبی (N).
• کاربرد اصلی: تست غربالگری کلیدی و اجباری در شناسایی باکتری‌های گرم‌منفی به ویژه برای تفکیک غیرتخمیرگرها (مانند Pseudomonas، Acinetobacter، Stenotrophomonas) از انتروباکتریاسه‌ها در میکروبیولوژی بالینی.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر محیط OF Glucose Medium ایبرسکو (IBRESco) را در جای خشک و خنک نگهداری کنید. از جوشاندن طولانی مدت محیط خودداری کنید. پس از اتوکلاو، لوله‌ها را به صورت ایستاده و سریع خنک کنید. محیط‌های آماده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد نگهداری نمود. قبل از استفاده، لوله‌ها باید به دمای اتاق برسند. تلقیح باید حتماً با سوزن کشت مستقیم و به صورت عمقی (Stab) انجام شود تا باکتری در سرتاسر ستون محیط پخش گردد. استفاده از لوپ ممکن است نتیجه را مخدوش کند. بلافاصله پس از تلقیح، روی یکی از لوله‌ها به اندازه کافی (حدود ۱ سانتی‌متر) روغن پارافین استریل اضافه کنید. لایه روغن باید پیوسته باشد تا از تبادل گاز جلوگیری کند. لوله‌ها را روزانه از نظر تغییر رنگ بررسی نمایید. تغییر رنگ زرد در قسمت بالای لوله هوازی (حتی اگر کم باشد) مثبت تلقی می‌شود. برخی از باکتری‌های اکسیداتیو ممکن است واکنش ضعیفی نشان دهند و زردی فقط در سطح دیده شود. باکتری‌های غیرمصرف‌کننده ممکن است با تجزیه پپتون‌ها، محیط را قلیایی (آبی) کنند. این تست نقطه شروع شناسایی غیرتخمیرگرهاست و پس از تعیین الگوی OF گلوکز، تست‌های بیوشیمیایی بیشتری (مانند اکسیداز، حرکت، استفاده از سایر قندها در OF Basal) برای شناسایی گونه ضروری است. برای باکتری‌های کندرشد، ممکن است نیاز به انکوباسیون طولانی‌تر باشد.