محیط کشت PE2 براث

محیط کشت براث پی‌ای ۲ (PE2 Broth)

محیط کشت PE2 Broth یک محیط غنی‌کننده انتخابی است که در برخی پروتکل‌های تشخیصی Listeria monocytogenes مورد استفاده قرار می‌گیرد. این محیط حاوی فسفات و اگزالات سدیم است که به عنوان عوامل انتخابی اولیه عمل می‌کنند. حضور این ترکیبات، رشد بسیاری از باکتری‌های گرم‌مثبت و گرم‌منفی رقیب را مهار می‌نماید، در حالی که لیستریا، به ویژه L. monocytogenes، معمولاً نسبت به آنها مقاوم است و می‌تواند تکثیر یابد. همچنین محیط با منابع مغذی مانند پپتون و عصاره مخمر غنی شده تا رشد لیستریا را تقویت کند. یکی از ویژگی‌های این محیط، عدم نیاز به افزودن آنتی‌بیوتیک در مرحله اولیه غنی‌سازی است که می‌تواند برای بازیابی سلول‌های آسیب‌دیده حرارتی یا تحت استرس مفید باشد. پس از دوره انکوباسیون اولیه در PE2 Broth، معمولاً یک مرحله غنی‌سازی ثانویه در یک محیط انتخابی قوی‌تر (مانند Fraser Broth) انجام شده و سپس کشت بر روی محیط جامد انتخابی (مانند Oxford Agar یا PALCAM Agar) صورت می‌پذیرد.

کاربرد اصلی این محیط در آزمایشگاه‌های کنترل کیفیت مواد غذایی، به ویژه برای نمونه‌هایی که احتمال حضور سلول‌های آسیب‌دیده لیستریا در آنها می‌رود، به عنوان مرحله پیش‌غنی‌سازی (Pre-enrichment) یا غنی‌سازی اولیه در پروتکل‌های چندمرحله‌ای تشخیص لیستریا است.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: مایع (براث)، انتخابی و غنی‌کننده برای لیستریا مونوسیتوژنز
• هدف کشت: غنی‌سازی انتخابی اولیه و بهبود بازیابی Listeria monocytogenes از نمونه‌های غذایی
• حالت فیزیکی: پودر (حاوی پپتون، عصاره مخمر، فسفات‌ها و اگزالات سدیم) که پس از حل کردن در آب مقطر و اتوکلاو، در لوله یا ظرف توزیع می‌شود.
• ترکیبات کلیدی: پپتون، عصاره مخمر، دی‌پتاسیم فسفات، پتاسیم دی‌هیدروژن فسفات، اگزالات سدیم
• عوامل انتخابی: اگزالات سدیم و فسفات‌ها که به عنوان مهارکننده‌های انتخابی فلور همراه عمل می‌کنند.
• اصول عملکرد: عوامل انتخابی (اگزالات و فسفات) رشد بسیاری از باکتری‌های رقیب را مهار می‌کنند. محیط غنی شده، تکثیر لیستریا را حتی در صورت حضور سلول‌های کم‌تعداد یا آسیب‌دیده امکان‌پذیر می‌سازد.
• شرایط کشت: نمونه غذایی (معمولاً ۲۵ گرم) به حجم مشخصی از محیط (معمولاً ۲۲۵ میلی‌لیتر) اضافه و به خوبی مخلوط می‌شود.
• شرایط انکوباسیون: ۳۰ درجه سانتی‌گراد به مدت ۲۴ تا ۴۸ ساعت.
• خوانش نتیجه: محیط فاقد نشانگر رنگی است. رشد به صورت کدورت مشاهده می‌شود، اما وجود کدورت به معنای حضور لیستریا نیست. پس از دوره انکوباسیون، کشت باید به یک محیط غنی‌کننده انتخابی قوی‌تر (مرحله دوم) منتقل و سپس روی محیط جامد کشت داده شود.
• کنترل کیفیت: سویه Listeria monocytogenes ATCC 19115: رشد خوب و ایجاد کدورت پس از ۲۴-۴۸ ساعت. سویه Escherichia coli ATCC 25922: مهار رشد یا رشد بسیار ضعیف.
• کاربرد اصلی: مرحله پیش‌غنی‌سازی یا غنی‌سازی اولیه در پروتکل‌های چندمرحله‌ای تشخیص Listeria monocytogenes در مواد غذایی، به ویژه برای نمونه‌های حاوی سلول‌های تحت استرس.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر محیط PE2 Broth ایبرسکو (IBRESco) را در جای خشک و خنک نگهداری کنید. از آب مقطر با کیفیت بالا برای تهیه محیط استفاده شود. پس از اتوکلاو، محیط را می‌توان در دمای اتاق یا در یخچال (۲-۸ درجه سانتی‌گراد) نگهداری کرد. قبل از استفاده، محیط باید به دمای اتاق رسیده باشد. نسبت نمونه به محیط معمولاً ۱:۹ است (مثلاً ۲۵ گرم نمونه در ۲۲۵ میلی‌لیتر محیط). نمونه‌های جامد باید به خوبی در محیط پخش شوند. دوره انکوباسیون معمولاً ۲۴ ساعت است، اما برای نمونه‌های با تعداد سلول بسیار کم یا آسیب‌دیده، انکوباسیون تا ۴۸ ساعت ممکن است لازم باشد. از آنجایی که این محیط ممکن است به تنهایی برای مهار کامل فلور همراه کافی نباشد، استفاده از آن به عنوان مرحله اول در یک پروتکل دو مرحله‌ای غنی‌سازی (دنبال شده توسط Fraser Broth) توصیه می‌شود. پس از انکوباسیون، ۰.۱ میلی‌لیتر از کشت PE2 به ۱۰ میلی‌لیتر Fraser Broth منتقل شده و مجدداً انکوبه می‌شود. سپس از Fraser Broth روی محیط جامد انتخابی کشت داده می‌شود. این روش دو مرحله‌ای حساسیت تشخیص را به طور قابل توجهی افزایش می‌دهد. تمام کشت‌های مشکوک به لیستریا باید با احتیاط و تحت شرایط ایمنی زیستی مناسب انجام شوند. محیط‌های استفاده شده باید به درستی ضدعفونی و دفع گردند.