محیط کشت YPD آگار

محیط کشت آگار وای‌پی‌دی (Yeast Extract Peptone Dextrose Agar)

محیط کشت Yeast Extract Peptone Dextrose Agar (YPD Agar) که گاهی YEPD Agar نیز نامیده می‌شود، یک محیط غنی و پایه‌ای در تحقیقات مخمرشناسی است. فرمولاسیون ساده و موثر آن شامل سه جزء اصلی است: عصاره مخمر (Yeast Extract) که منبعی غنی از ویتامین‌های گروه B، نوکلئوتیدها و فاکتورهای رشد ضروری است؛ پپتون (Peptone) که نیتروژن آلی، اسیدهای آمینه و پپتیدها را فراهم می‌کند؛ و دکستروز (Dextrose یا گلوکز) که به عنوان منبع کربن و انرژی سریع‌الاستفاده عمل می‌نماید. این ترکیب، یک محیط کاملاً مغذی برای رشد بهینه طیف وسیعی از مخمرها ایجاد می‌کند. YPD Agar یک محیط غیرانتخابی است و بنابراین برای کشت خالص مخمرها یا به عنوان محیط پایه برای افزودن عوامل انتخابی خاص (مانند اسید آمینه‌های خاص برای سویه‌های آکسوتروف یا آنتی‌بیوتیک‌ها برای انتخاب مقاومت) ایده‌آل است. به دلیل محتوای مغذی بالا، نرخ رشد سریع و بازده کلونی بالایی را فراهم می‌آورد و اغلب برای نگهداری ذخایر کشت، تهیه لawn برای آماده سازی DNA و انجام آزمایش‌های ژنتیکی روی مخمر استفاده می‌شود.

کاربرد اصلی آن در تحقیقات ژنتیک مولکولی، بیوشیمی و سلولی مخمر، صنایع تخمیر و بیوتکنولوژی، و آزمایشگاه‌های آموزشی و تحقیقاتی میکروبیولوژی است. این محیط استاندارد طلایی برای کار با Saccharomyces cerevisiae محسوب می‌شود.

مشخصات کلیدی

• نوع محیط: جامد (آگار)، بسیار غنی (Rich)، غیرانتخابی، برای کشت عمومی مخمرها.
• هدف کشت: کشت، نگهداری و رشد بهینه مخمرها، به ویژه Saccharomyces cerevisiae و گونه‌های مرتبط.
• حالت فیزیکی: پودر (تهیه شده در آب مقطر، حرارت داده شده تا حل شود و سپس اتوکلاو می‌شود).
• ترکیبات کلیدی تغذیه‌ای: عصاره مخمر (منبع ویتامین‌ها و فاکتورهای رشد)، پپتون (منبع نیتروژن آلی)، دکستروز (گلوکز) (منبع کربن).
• مکانیسم عمل: فراهم آوری یک بستر مغذی کامل حاوی تمام پیش‌نیازهای متابولیک برای رشد سریع و کارآمد مخمرها.
• شرایط کشت: روش‌های مختلف کشت سطحی (Streak Plate برای جداسازی تک کلونی، Spread Plate یا Pour Plate برای شمارش).
• شرایط انکوباسیون: معمولاً ۳۰ درجه سانتی‌گراد (دمای بهینه برای S. cerevisiae) به مدت ۲۴ تا ۴۸ ساعت. برای برخی گونه‌ها ممکن است دمای پایین‌تر (۲۵-۲۸ درجه) مناسب باشد.
• خوانش نتیجه: مشاهده رشد کلونی‌های مخمری. کلونی‌های S. cerevisiae معمولاً کرمی، براق، محدب و با بوی مخمری مشخص هستند. اندازه و مورفولوژی ممکن است بین گونه‌ها و سویه‌ها متفاوت باشد.
• کنترل کیفیت: رشد خوب، سریع و یکنواخت با سویه استاندارد Saccharomyces cerevisiae BY4741 یا هر سویه آزمایشگاهی معتبر دیگر. عدم رشد باکتریایی ناخواسته (محیط باید عاری از آلودگی باشد).
• کاربرد اصلی: محیط استاندارد کشت و نگهداری مخمر ساکارومایسس سرویزیا و سایر مخمرها در تحقیقات ژنتیکی و بیولوژیکی، تهیه کشت سلولی برای آزمایش‌ها، و به عنوان پایه برای محیط‌های انتخابی در مهندسی ژنتیک مخمر.

نکات کاربردی و نگهداری

پودر Yeast Extract Peptone Dextrose Agar محصول ایبرسکو (IBRESco) باید در جای خشک و خنک نگهداری شود. برای تهیه محیط، پودر را در آب مقطر حل کرده و با حرارت ملایم به جوش آورید تا کاملاً شفاف شود (گلوکز ممکن است به کاراملیزاسیون حساس باشد، بنابراین از حرارت بیش از حد خودداری شود). سپس اتوکلاو نمایید (معمولاً در ۱۲۱ درجه سانتی‌گراد به مدت ۱۵ دقیقه). پس از اتوکلاو، محیط را تا حدود ۴۵-۵۰ درجه سانتی‌گراد سرد کرده و در صورت نیاز، مکمل‌های استریل (مانند اسیدهای آمینه برای سویه‌های آکسوتروف، یا آنتی‌بیوتیک‌ها مانند Hygromycin B، Geneticin/G418) را اضافه کنید. سپس در پلیت‌های استریل بریزید. پلیت‌های آماده را می‌توان در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد برای چند هفته در بسته‌بندی محکم نگهداری کرد. قبل از استفاده، پلیت‌ها باید به دمای اتاق برسند و سطح آن‌ها خشک باشد. برای کارهای ژنتیکی حساس، اطمینان از عدم وجود آلودگی باکتریایی یا قارچی در محیط الزامی است. از آنجایی که این محیط غیرانتخابی است، تکنیک‌های استریل کار دقیق باید رعایت شود. برای تکثیر سریع، مخمرها اغلب ابتدا در YPD Broth کشت مایع داده شده و سپس روی YPD Agar کشت سطحی می‌شوند. این محیط اغلب به عنوان محیط “کامل” یا “غنی” در مقابل محیط‌های حداقلی (مانند SC یا SD) در آزمایش‌های ژنتیکی مخمر استفاده می‌شود.