Description
معرف ایندول کواکس
KOVACS/ INDOL REAGENT
فهرست مطالب
آزمایش ایندول چیست؟
KOVACS/ INDOL REAGENT
– For in vitro use only –
معرف ایندول کواکس (Kovacs) برای تشخیص وجود ایندول، که یکی از محصولات نهایی اکسیداسیون باکتریایی اسید آمینه، تریپتوفان است، استفاده می شود.
تریپتوفان یک اسید آمینه است که می تواند توسط برخی باکتری ها اکسید شود و سه محصول نهایی اصلی را در طی واکنش دآمیناسیون احیایی تشکیل دهد. تریپتوفاناز واکنش دآمیناسیون را کاتالیز می‌کند، که در طی آن گروه آمین از مولکول تریپتوفان حذف می‌شود
سه محصول نهایی شامل: ایندول، اسید پیروویک و آمونیاک می باشند و پیریدوکسال فسفات به‌عنوان کو آنزیم موردنیاز است.
تشخیص ایندول نشان دهنده تجزیه تریپتوفان است و می تواند با افزودن برخی آلدئیدها برای تشکیل محصولات نهایی رنگی انجام شود. ماده فعال موجود در معرف Kovacs، p-dimethyl amino benzaldehyde، با ایندول واکنش می دهد و محصول نهایی صورتی مایل به قرمز را تشکیل می دهد که بسیار قابل مشاهده است.
ازآنجاکه تریپتوفان با ۴-دی متیل آمینوبنزالدهید نیز واکنش رنگی ایجاد می‌کند، باید از ایندول جدا شود. این امر با استخراج انتخابی ایندول با بوتانول حاصل می‌شود.
آزمایش ایندول روی کشت‌هایی که در محیط‌های براث حاوی مقدار مناسب تریپتوفان مانند براث کازئین رشد کرده‌اند، انجام می‌شود. استفاده از معرف Kovacs برای محیط های آزمایش ترکیبی مانند محیط ایندول-نیتریت، محیط حرکتی-ایندول-لیزین (MIL)، محیط حرکتی-ایندول-اورنیتین (MIO) و محیط سولفید-ایندول-حرکت ((SIM) توصیف شده است.
موارد استفاده از معرف کواکس:
در حضور اکسیژن، برخی از باکتری‌ها، مانند اشرشیا کولی، می‌توانند تریپتوفان را به اندول و اسید آلفا-آمینوپروپیونیک تبدیل کنند. این معرف برای شناسایی ایندول و شناسایی میکروارگانیسم‌های ایندول مثبت و ایندول منفی است.
ممکن است در آزمون spot برای تعیین ایندول و به دنبال آن تعیین مقدار آن با استفاده از روش اسپکتروفتومتری و روش‌های HPLC-UV / Vis-MS / MS استفاده شود.
همچنین آزمایش ایندول با استفاده از معرف Kovacs می تواند برای کمک به تمایز بین انواع مختلف باکتری ها باشد.
شرکت توسعه سلامت توان آفرین (تستا) انواع فراورده های شیمیایی نظیر معرف ایندول کواکس را عرضه می نماید.
ترکیبات معرف ایندول کواکس:
ترکیبات موجود در ۱۰۰ میلی لیتر از معرف کواکس به شرح زیر است:
…………………………………. ۵ گرم p-Dimethyl amino benzaldehyde
ایزوآمیل الکل …………………………………… ۷۵ میلی لیتر
اسید کلریدریک ……………………………….. ۲۵ میلی لیتر
روش انجام آزمایش ایندول:
۱. از یک محیط آغشته شده به ۴ میلی لیتر از کازئین (سرشار از تریپتوفان) یا براث تریپتون که به آهستگی که در طی یک شبانه روز بر محیط کشت، آغشته و کشت داده شده است استفاده نمایید.
۲. در دمای ۳۵ درجه سانتیگراد به مدت ۲۴ یا ۴۸ ساعت انکوباسیون انجام دهید . اگر آزمایش ایندول بعد از ۲۴ ساعت انجام شود، توصیه می شود که یک قسمت ۲.۰ میلی لیتری به صورت آسپتیک برای آزمایش برداشته شود. در صورت منفی بودن، مابقی محیط را باید به مدت ۲۴ ساعت دیگر مجدداً انکوبه شود و مجدداً آزمایش شود.
۳. پنج قطره (۵ میلی لیتر) از معرف ایندول کواکس را اضافه کنید و لوله را به آرامی تکان دهید.
۴. فوراً تغییر رنگ را بررسی کنید.
تفسیر نتایج
مثبت: ایجاد رنگ قرمز در سطح مشترک معرف و محیط در عرض ۳۰ ثانیه
متغیر: رنگ نارنجی در سطح محیط (معمولاً بعد از ۲۴ ساعت رخ می دهد، همانطور که اشاره شد دوباره انکوبه کنید)
منفی: بدون تغییر رنگ (زرد)
عرضه مستقیم لوازم و تجهیزات آزمایشگاهی ، انواع لوازم مصرفی، فراورده های آزمایشگاهی، انواع کیت های آزمایشگاهی تشخیص سریع الایزا مولکولی زیبایی دامپزشکی و غیره توسط تستا شاپ واحد فروش آنلاین شرکت تستا توزیع می گردد.
- Kovacs N. Eine vereinfachte methode zum nachweis der indolbidung durch bakterien. Z Immunitaetsforsch 1928; 55:311-5.
- Reed RW. Nitrate, nitrite, and indole reactions of gas gangrene anaerobes. J Bacteriol 1942; 44:425-32.
IMViC Tests- Principle, Procedure, Results, Uses, Limitations (microbenotes.com)
الایزا
کیت های بیوشیمی
کیت های مولکولی و سایر
کیت های دامپزشکی
کیت های زیبایی
تجهیزات آزمایشگاهی
کیت های تشخیص سریع
مصرفی
علی –
ممنون از توضیحات جامعتون
علی رزوانی