Description
معرف MR-VP - معرف متیل رد
Methyl Red and Voges
فهرست مطالب
معرف محیط کشت MR-VP
کاربرد: جهت شناسایی باسیل های گرم منفی روده ای مورد استفاده قرار می گیرد و یک محیط کشت افتراقی می باشد.
تستا شاپ معرف محیط کشت MR-VP را با برند های مختلف و با کیفیت عرضه می کند :
برندهای: پادتن طب – زیست رویش – میرمدیا – بهارافشان
انواع معرف متیل رد: معرف MR – معرف VP1 – معرف VP2 – معرف MR-Vp Medium – معرف MR-VP پک کامل – محیط کشت MR – محیط کشت VP – محیط کشت MR-VP
معرف محیط کشت MR-VP
Methyl Red and Voges-Proskauer Test Protocols
محیط کشت MR-VP دارای ترکیبات پپتیک ، دکستروز، دی پتاسیم فسفات می باشد و در شناسایی باسیل های گرم منفی روده ای مورد استفاده قرار می گیرد و یک محیط کشت افتراقی می باشد.
در سال ۱۸۹۸ Voges و Proskauer تخمیر قندها توسط باکتری های ایزوله شده مختلف را مشخص کردند. آنها نشان دادند که گاز تولید شده در طی تخمیر مخلوطی از CO2 و H2 است و با افزودن KOH به کشت هایی که در محیط کشت پپتون گلوکز برای انکوباسیون طولانی مدت در حضور اکسیژن رشد کرده بودند، برخی از موجودات یک رنگ فلورسنت قرمز تولید کردند.
اگرچه ماهیت رنگ‌بندی در آن زمان مشخص نبود، این روش برای تمایز بین باکتریایی که رنگ را تولید می‌کنند و آنهایی که تولید نمی‌کنند پیشنهاد شد.
در سال ۱۹۰۶، آرتور هاردن محصولات تخمیر انتروباکتر آئروژنز را تجزیه و تحلیل کرد و دریافت که در حضور گلوکز، ارگانیسم استوئین و ۲،۳-بوتاندیول تولید می کند. هنگام آزمایش هر دو ترکیب در حضور KOH، هیچ کدام رنگ صورتی مایل به قرمز توصیف شده توسط Voges و Proskauer را تولید نکردند.
با این حال، افزودن پپتون به واکنش، رنگ بندی توصیف شده را در حضور استوئین به همراه داشت. هاردن پیشنهاد کرد که استوئین به دی استیل اکسید می شود که به نوبه خود با ترکیبات موجود در مخلوط پپتون واکنش داده و محصول رنگی را تشکیل می دهد. بعدها مشخص شد که وجود یک گروه گوانیدین (روی ترکیبی در پپتون) برای واکنش رنگ ضروری است.
هدف از استفاده معرف MR-VP
تست‌های متیل رد و Voges-Proskauer بخشی از مجموعه آزمایش‌های بیوشیمیایی هستند که به نام IMViC در آزمایشگاه بالینی استفاده می‌شوند. مخفف IMViC مخفف ایندول، متیل قرمز، Voges-Proskauer و سیترات است. “i” در مخفف برای تلفظ اضافه شده است.
در ابتدا از تست‌های MR-VP زوجی برای تمایز بین اعضای خانواده انتروباکتریاسه استفاده می‌شد، اما اکنون از آنها برای مشخص کردن سایر گروه‌های باکتری از جمله اکتینوباکتریا استفاده می‌شود.
هر دو تست متیل رد و Voges-Proskauer معمولاً همراه با آزمایش‌های ایندول و سیترات استفاده می‌شوند تا گروهی از آزمایش‌ها به نام IMViC را تشکیل دهند که به تمایز انتروباکتریا کمک می‌کنند.
معرف متیل رد (MR)
اشریشیا کلی (Escherichia coli) و سایر اعضای ارگانیسم های کم نسبت توصیف شده توسط کلارک و لوبس، قندها را از طریق مسیر اسیدی مخلوط تخمیر می کنند و در نتیجه نسبت کم CO2 به گاز H2 حاصل از تخمیر تولید می شود.
متیل رد یا ۲-N و N دی متیل ۴- آمینو فنیل آزوبنزن کربوکسیلیک اسید معرف pH است.
فرمول شیمیایی متیل رد C۱۵H۱۵N۳O۲ و دارای دو حلقه بنزن، یک گروه عاملی کربوکسیلیک اسید و یک گروه دی متیل آمین است که حلقههای بنزن توسط گروه آزو به یکدیگر متصل شده‌اند.
مسیر اسید مخلوط ۴ مول محصولات اسیدی (عمدتا اسید لاکتیک و استیک)، ۱ مول محصول تخمیر خنثی (اتانول)، ۱ مول CO2 و ۱ مول H2 به ازای هر مول گلوکز تخمیر شده می دهد.
مقدار زیاد اسیدهای تولید شده باعث کاهش قابل توجهی در pH محیط کشت می شود. در مقابل، انتروباکتر آئروژن ها و دیگر اعضای ارگانیسم های با نسبت بالا (آنهایی که نسبت بالایی از CO2 به H2 را از تخمیر گلوکز تولید می کنند) قندها را از طریق مسیر تخمیر بوتاندیول تخمیر می کنند و تنها ۱ مول اسید در هر مول گلوکز تولید می کنند.
این مسیر منجر به درجه کمتر اسیدی شدن محیط کشت می شود.
متیل رد یا ۲-N و N دی متیل ۴- آمینو فنیل آزوبنزن کربوکسیلیک اسید معرف pH است.
نشانگر pH متیل قرمز (pdimethylaminoaeobenzene-O-carboxylic acid) برای اندازه گیری غلظت یون هیدروژن بین pH 4.4 (قرمز) و ۶.۰ (زرد) مناسب است. متیل رد در محیط اسیدی قرمز رنگ (pH=4.4) و در محیط های بازی (pH=6) زرد رنگ است.
هنگامی که محیط کشت پس از افزودن متیل رد قرمز می شود، به دلیل PH در ۴.۴ یا کمتر از تخمیر گلوکز، کشت یک نتیجه مثبت برای آزمایش MR دارد . آزمایش MR منفی با رنگ زرد در محیط کشت نشان داده می شود که زمانی رخ می دهد که اسید کمتری (PH بالاتر) از تخمیر گلوکز تولید شود.
ویژگی‌های فیزیکی و شیمیایی متیل رد
وضعیت ظاهری: پودر قرمز تیره تا قرمز بنفش
چگالی: ۰.۷۹۱ گرم بر سانتیمتر مکعب
نقطه ذوب: ۱۸۲-۱۷۹ درجه سانتیگراد
حلالیت: محلول در اتانول
تولید متیل رد
متیل رد از واکنش دی آزونیومدار کردن آنترانیلیک اسید و به دنبال آن واکنش با دی متیل آنیلین به دست میآید. معرف متیل رد عبارت است از ۰.۱ گرم پودر متیل رد در ۳۰۰ میلیلیتر اتانول ٩۵% و ۲۰۰میلیلیتر آب مقطر. ابتدا پودر متیل رد در اتانول حل شده و سپس به آن آب اضافه می‌شود.
کاربرد متیل رد
- در هیستوپاتولوژی برای نمایش ماهیت اسیدی بافت و حضور ارگانیسمهایی با دیواره سلولی اسیدی
- عامل فلورسانس
- تمایز باکتریها از نظر تولید اسید
نکات ایمنی
خوشبختانه متیل رد در زمره ترکیبات خطرناک و مسمومکننده نیست و در صورت تماس با پوست و چشم کافی است موضع با آب شسته شود و در صورت بلع به فرد آب نوشانده شود.
در اثر اشتعال این ترکیب گازهای نیتروژن و نیتروژن اکسید تولید می‌شود؛ بنابراین حین اطفای حریق این ترکیب باید از دستگاه تنفس فردی استفاده نمود.
معرف آلفا نفتول و معرف پتاس (VP)
Voges-Proskauer
بعضی از باکتری ها زمانی که در محیط کشت های خاصی کشت داده می شوند، محصولات نهایی خنثی تولید می کنند. باکتری های خاص روده ای که گلوکز را تخمیر می کنند، بیشتر متابولیزهای پیروویک اسید به صورت استوئین می باشد.
این محصول نهایی، در حضور اکسیژن و هیدروکسید پتاسیم به دی استیل تبدیل می شود. دی استیل در حضور آلفا نفتول به یک ترکیب قرمز تبدیل می شود.
قندهای تخمیرکننده باکتری از طریق مسیر بوتاندیول استوئین (به عنوان مثال استیل متیل کاربینول یا ۳-هیدروکسی بوتانون) را به عنوان یک واسطه تولید می کنند که می تواند بیشتر به ۲،۳-بوتاندیول کاهش یابد.
۲ pyruvates = acetoin + 2CO2
استوئین+ NADH + H + = 2،۳ – بوتاندیول + NAD +
در حضور KOH، استوئین میانی به دی استیل اکسید می شود، واکنشی که توسط a-naphthol کاتالیز می شود. دی استیل با گروه گوانیدین مرتبط با مولکول های ایجاد شده توسط پپتون در محیط واکنش می دهد و محصولی به رنگ صورتی مایل به قرمز تشکیل می دهد .
a-naphthol در اصلاح Barritt در تست VP به عنوان یک تشدید کننده رنگ عمل می کند.
در این تست محیط کشت MR-VP که میکروارگانیسم به آن تلقیح شده است، مورد استفاده قرار می‌گیرد. انکوباسیون ۲۴ تا ۴۸ ساعت در دمای ۳۵ درجه سانتیگراد انجام می شود.
۱ میلی لیتر از محیط کشت انکوبه شده را به یک لوله آزمایش تمیز انتقال دهید و ۱۵ قطره آلفا نفتول اضافه کنید و سپس ۵ قطره محلول ۴۰ درصد پتاس بریزید. به آرامی تکان دهید.
ظاهر شدن رنگ قرمز در عرض ۲۰ دقیقه را بررسی کنید. اگر تست ۲۴ ساعته منفی باشد، تست را با آزمایش ۴۸ ساعته تکرار کنید. اگر نتایج معکوس بدست آید، تست را با محیط کشت هایی که به مدت ۵ روز در ۲۵ تا ۳۰ درجه سانتی گراد انکوباسیون شده اند، تکرار کنید.
انواع معرف متیل رد و محیط کشت های آماده که توسط شرکت توسعه سلامت توان آفرین توزیع می گردد در این پست به طور کامل ارائه گردیده است.
به زودی پست اختصاصی محیط های کشت آماده MR-VP ارائه خواهد شد. منتظر پست های اختصاصی هر محصول در سایت تستا باشید.
طرز تهیه محیط کشت MR-VP
در ادامه روش تهیه محیط کشت MR-VP Medium معرفی می گردد:
- ۱۷.۰ گرم از پودر محیط کشت MR-VP Medium را در ۱۰۰۰ میلی لیتر آب مقطر معلق کنید.
- در صورت لزوم حرارت دهید تا محیط کاملا حل شود.
- با اتوکلاو کردن در فشار ۱۵ پوند (۱۲۱ درجه سانتیگراد) به مدت ۱۵ دقیقه استریل کنید.
- در لوله های آزمایش به مقدار ۱۰ میلی لیتر توزیع نمایی می گردد.
- https://asm.org/getattachment/0c828061-9d6f-4ae7-aea3-66e1a8624aa0/Methyl-Red-and-Voges-Proskauer-Test-Protocols.pdf
- Madigan, M. T., and J. M. Martinko. 2008. Brock biology of microorganisms, 12th ed. Benjamin Cummings, Upper Saddle River, NJ.
۳.۸: Methyl Red - Voges-Proskauer (MR-VP) Broth - Biology LibreTexts
الایزا
کیت های بیوشیمی
کیت های مولکولی و سایر
کیت های دامپزشکی
کیت های زیبایی
تجهیزات آزمایشگاهی
کیت های تشخیص سریع
مصرفی
testa_admin –
سلام
لطفاً نظرات و تجربیات خود را در خصوص این محصول با ما در میان بگذارید.
با سپاس – سایت تستا