Description
معرفی کیت الایزا ویتامین دی پیشتاز طب
Vitamin D 25-OH Elisa
فهرست مطالب
خرید کیت الایزا ویتامین د۳ کوله کلسیفرول
کاربرد: جهت سنجش ۲۵ OH ویتامین D به روش ELISA.
تستا عرضه کننده کیت الایزا ویتامین دی پیشتاز طب
برند: پیشتاز طب
تعداد در بسته: ۱۹۲ تستی – ۹۶ تستی
محتویات: ۲ پلیت ۹۶ test آماده – ۲ بطری محلول شستشو – ۲ بطری معرف – ۲ ویال رقیق کننده – چند ویال از بافرهای مختلف – کنترل سرم های H و L – محلول کانژوگه – سری ۶ گانه استانداردها و دفترچه راهنما
قیمت ۱۹۲ تستی : ۱,۷۰۰,۰۰۰ تومان
قیمت ۹۶ تستی : ۱,۰۰۰,۰۰۰ تومان
شرکت توسعه سلامت توان آفرین (تستا)، کیت ویتامین د۳ کوله کلسیفرول را معرفی و عرضه می نماید.
برای خرید کیت الایزا ویتامین دی پیشتاز طب در تستا شاپ ثبت سفارش نمایید.
معرفی کیت الایزا ویتامین دی پیشتاز طب (کیت ۲۵ هیدروکسی ویتامین دی)
ویتامین د۳ کوله کلسیفرول چیست؟
ویتامین D نام رایج گروهی از پروهورمون‌های استروئیدی محلول در چربی است که در جنبه‌های مختلف سلامت انسان بسیار مهم است. دو شکل مربوط به انسان عبارتند از ویتامین D2، ارگوکلسیفرول، و ویتامین D3، کوله کلسیفرول. ویتامین D2 و D3 هر دو به طور طبیعی در برخی غذاها وجود دارند و همچنین به بسیاری از مواد غذایی اضافه می شوند. مصرف مکمل ویتامین D توسط مکمل های غذایی در بسیاری از کشورها به ویژه در دوران بارداری و زمانی که قرار گرفتن در معرض نور خورشید به دلایل اقلیمی یا فرهنگی محدود است، توصیه می شود.
عملکردهای ویتامین D3
شکل اصلی گردش ویتامین د۳ کوله کلسیفرول در بدن، فرم ۲۵ هیدروکسیله۲۵ OH D) به نام کلسیدیول) است. ویتامین D3 در کبد به ۲۵ هیدروکسی ویتامین D3 متابولیزه می شود و اخیراً مشخص شده است که ۲۵OH D3 نیز مستقیماً از برخی غذاهای حیوانی در دسترس است. ۲۵OH D3 به خودی خود فعالیت محدودی دارد و به عنوان پیش ساز سایر متابولیت های ویتامین D عمل می کند. در کلیه، ۲۵OH D3 به ۱و۲۵- دی هیدروکسی ویتامین D3 یا کلسیتریول، به نوع فعال ترین آن یعنی (ویتامین د۳ کوله کلسیفرول) تبدیل می شود.
ویتامین D2 اساساً در مسیرهای مشابه ویتامین د۳ کوله کلسیفرول متابولیزه می شود و هر دو D2 و D3 به وضعیت کلی ویتامین D کمک می کنند. برای تشخیص درست کمبود، نارسایی یا مسمومیت ویتامین D، اندازه گیری هر دو شکل D2 و D3 ویتامین D بسیار مهم است. مطمئن ترین راه برای تعیین وضعیت ویتامین D یک فرد، اندازه گیری سطح ۲۵OH D در خون است: ۲۵OH D نیمه عمر نسبتا طولانی ۱۵ روز در گردش دارد و سطح ۲۵OH D منعکس کننده ویتامین D است که هم از طریق خوردن غذا و مکمل های غذایی و هم ویتامین D تولید شده در پوست به دست می آید.
ویتامین د۳ کوله کلسیفرول جذب روده ای کلسیم و فسفر را تحریک می کند و بر جذب و معدنی شدن استخوان تأثیر می گذارد. کمبود ویتامین D می تواند باعث ضعیف شدن استخوان ها شود: این یک عامل خطر مهم برای راشیتیسم، استئومالاسی و پوکی استخوان پیری است.
اهمیت اندازه گیری ویتامین D3
اندازه گیری ۲۵OH هر دو ویتامین D2 و D3 نیز برای تعیین علت غلظت غیر طبیعی کلسیم سرم ضروری است. سطوح بیش از حد ویتامین D( مسمومیت با ویتامین D) می تواند منجر به آسیب کلیه و بافت شود. مشخص شده است که ویتامین D چندین نقش دیگر در بدن دارد، از جمله تعدیل رشد سلولی، عملکرد عصبی عضلانی و ایمنی، و کاهش التهاب. ارتباط بین اختلالات شناختی، زوال عقل و کمبود ویتامین D نیز تایید شده است. ادبیات اخیر همچنین شواهد نوظهوری از نقش های متعدد ویتامین D در سرطان، دیابت و پیامدهای بارداری ارائه کرده است.
ویتامین د۳ کوله کلسیفرول به عنوان یک واسطه ضروری برای جذب کلسیم روده ای و متابولیسم کلسیم استخوان استفاده می شود. همچنین به عنوان یک ویتامین درمانی استفاده می شود. علاوه بر این، به عنوان یک مکمل غذایی و برای تقویت غذاها استفاده می شود. علاوه بر این، از آن به عنوان داروی دارویی استفاده می شود و در درمان بیماری های تنفسی شامل التهاب مزمن مانند آسم استفاده می شود.
مواد غذایی غنی از ویتامین دی
ویتامین D هم ماده مغذی است که می خوریم و هم هورمونی است که بدن ما می سازد. این یک ویتامین محلول در چربی است که مدتهاست به بدن کمک می کند تا کلسیم و فسفر را جذب و حفظ کند. هر دو برای ساخت استخوان بسیار مهم هستند. همچنین، مطالعات آزمایشگاهی نشان می دهد که ویتامین D می تواند رشد سلول های سرطانی را کاهش دهد، به کنترل عفونت ها و کاهش التهاب کمک کند. بسیاری از اندام‌ها و بافت‌های بدن گیرنده‌هایی برای ویتامین D دارند که نشان‌دهنده نقش مهمی فراتر از سلامت استخوان است و دانشمندان فعالانه در حال بررسی سایر عملکردهای احتمالی هستند.
تعداد کمی از غذاها به طور طبیعی حاوی ویتامین D هستند، اگرچه برخی از غذاها با این ویتامین غنی شده اند. برای اکثر مردم، بهترین راه برای دریافت ویتامین D کافی، مصرف مکمل است، زیرا خوردن به اندازه کافی از طریق غذا سخت است. مکمل های ویتامین D به دو شکل موجود هستند: ویتامینD2 ( ارگو کلسیفرول) یا پیش ویتامینD3 (کوله کلسیفرول). هر دو نیز اشکال طبیعی هستند که در حضور پرتوهای فرابنفشB (UVB) خورشید تولید می‌شوند، از این رو لقب آن، “ویتامین آفتاب” است، اما D2 در گیاهان و قارچ‌ها و D3 در حیوانات، از جمله انسان، تولید می‌شود.
تولید ویتامین D در پوست منبع طبیعی اولیه ویتامین D است، اما بسیاری از افراد به دلیل اینکه در مکان‌هایی زندگی می‌کنند که نور خورشید در زمستان محدود است، یا به دلیل قرار نگرفتن در معرض نور خورشید در بیشتر اوقات در داخل بدن، میزان کافی ویتامین D را ندارند. همچنین، افرادی که پوست تیره‌تری دارند، سطح ویتامین D خونی پایین‌تری دارند، زیرا رنگدانه (ملانین) مانند یک سایه عمل می‌کند و تولید ویتامین D را کاهش می‌دهد (و همچنین اثرات مخرب نور خورشید بر پوست، از جمله سرطان پوست) را کاهش می‌دهد.
مقادیر توصیه شده
مقدار توصیه شده رژیم غذایی برای ویتامین D مقدار روزانه مورد نیاز برای حفظ استخوان های سالم و متابولیسم طبیعی کلسیم در افراد سالم را فراهم می کند. حداقل قرار گرفتن در معرض نور خورشید را در نظر می گیرد.
RDA: مقدار مجاز رژیم غذایی توصیه شده برای بزرگسالان ۱۹ سال و بالاتر ۶۰۰ IU (15 mcg) در روز برای مردان و زنان و برای بزرگسالان ۷۰ سال بیشتر ۸۰۰IU (20mcg) در روز است.
UL: سطح بالای مصرف قابل تحمل حداکثر میزان مصرف روزانه است که بعید است اثرات مضری بر سلامتی داشته باشد. UL ویتامین D برای بزرگسالان و کودکان بالای ۹ سال ۴۰۰۰IU (100mcg) است.
بسیاری از افراد ممکن است حداقل نیاز به ویتامین را برآورده نکنند. برخی از داده ها نشان داده که متوسط دریافت ویتامین D از غذا و مکمل ها در زنان ۵۱ تا ۷۱ ساله ۳۰۸ واحد بین المللی در روز بود، اما تنها ۱۴۰ واحد بین المللی از غذا (شامل محصولات غنی شده). در سراسر جهان، تخمین زده می شود که ۱ میلیارد نفر سطح ناکافی ویتامین D در خون خود دارند و کمبود آن در تمام قومیت ها و گروه های سنی دیده می شود.
در کشورهای صنعتی، پزشکان شاهد ظهور مجدد راشیتیسم هستند، بیماری ضعیف‌کننده استخوان که تا حد زیادی از طریق غنی‌سازی ویتامین D ریشه‌کن شده بود. بحث های علمی در مورد اینکه افراد به چه مقدار ویتامین D در روز نیاز دارند و سطح سرمی بهینه برای جلوگیری از بیماری باید چقدر باشد، وجود دارد. موسسه پزشکی IOMدر نوامبر ۲۰۱۰ توصیه هایی را برای افزایش مصرف روزانه ویتامین D برای کودکان و بزرگسالان در ایالات متحده و کانادا به ۶۰۰ IU در روز منتشر کرد. این گزارش همچنین حد بالایی را از ۲۰۰۰ به ۴۰۰۰ IU در روز افزایش داد.
اگرچه برخی از گروه‌ها مانند انجمن غدد درون ریز مصرف روزانه ۱۵۰۰ تا ۲۰۰۰ واحد بین‌المللی را برای رسیدن به سطح سرمی ویتامین D توصیه می‌کنند، IOM احساس می‌کند که شواهد کافی برای ایجاد ارتباط علت و معلولی بین ویتامین D و فواید سلامتی به جز برای استخوان وجود ندارد. سلامتی. از آن زمان، شواهد جدید از مزایای دیگر مصرف مقدار کافی ویتامین D حمایت کرده است، اگرچه هنوز هیچ اتفاق نظری در مورد مقدار کافی در نظر گرفته نشده است.
اصل آزمون
سنجش ELISA ویتامین D پیشتاز طب توتال ۲۵OH یک سنجش ایمونوسوربنت رقابتی مرتبط با آنزیم (ELISA) مبتنی بر میکروپلیت است. این تکنیک از آنتی بادی مونوکلونال ضد ویتامینD ) (mAb Anti-25-OH D استفاده می کند که در چاهک های میکروتیتر پوشانده شده است. ابتدا نمونه‌ها، کنترل‌ها و کالیبراتورها به چاهک‌های صفحه میکروتیتر اضافه می‌شوند. سرم ها و استانداردهای بیمار و به دنبال آن مقدار مشخصی بافر استخراج اضافه می شود تا ویتامین D از پروتئین اتصال دهنده آن (DBP-complex) آزاد شود.
بلافاصله پس از آن انکوباسیون میگردد. در طول مرحله انکوباسیون ۲ ساعته در دمای اتاق، ۲۵OHD از پروتئین های سرم/پلاسما جدا می شود و به آنتی بادی مونوکلونال اختصاصی ۲۵OHD که روی چاه میکروتیتر پوشانده شده است، متصل می شود. چاه ها شسته می شوند تا اجزای غیر متصل شده حذف شوند.
پس از اولین مرحله انکوباسیون و شستشو، مقدار ثابتی ویتامین D 25-OH بیوتینیله و استرپتاویدین کونژوگه با HRP به طور همزمان به چاهک ها اضافه می شود. . معرف های اضافه شده، که به شکل پیچیده هستند (بیوتینیله ۲۵OH ویتامین D متصل به استرپتاویدین-HRP) ، با ویتامین D سرم درون زا برای تعداد محدودی از محل های اتصال روی آنتی بادی های پوشش داده شده ضد ویتامین D رقابت می کنند.
در طول انکوباسیون بعدی، ۲۵OHD نشاندار شده و ۲۵OHD غیر نشاندار متصل به آنتی بادی با یکدیگر برای مکان های اتصال آنتی بادی رقابت می کنند. سپس چاه ها شسته می شوند تا مواد غیر متصل شده حذف شوند و محلولی از سوبسترای کروموژن Tetra methyl benzidine (TMB) به آن اضافه شده به مدت ۱۵ دقیقه انکوبه می شود و در نتیجه رنگ آبی ایجاد می شود.
توسعه رنگ با افزودن محلول Stop متوقف می شود. رنگ به زرد تغییر یافته و به روش اسپکتروفتومتری در ۴۵۰ نانومتر شدت رنگ ایجاد شده اندازه گیری می شود. غلظت ۲۵OHD با رنگ تولید شده نسبت معکوس دارد و می تواند با درون یابی دوز از منحنی کالیبراسیون محاسبه شود. با ارجاع به یک سری استانداردهای ویتامین D که به همین روش مورد سنجش قرار گرفته‌اند، غلظت ۲۵OH ویتامین D در نمونه ناشناخته اندازه‌گیری می‌شود.
مشخصات کیت الایزا ویتامین دی پیشتاز طب
مواد ارائه شده به همراه کیت الایزا ویتامین دی پیشتاز طب:
- چاهک های پوشش داده شده با آنتی بادی (۲پلیت، ۹۶ چاه): چاه های میکروتیتر پوشش داده شده با مونوکلونال آنتی ۲۵OH ویتامین D.
- بافر سنجش (۱ ویال، ۱۵ میلی لیتر): حاوی محلول بافر سنجش (آماده به مصرف)
- بافر استخراج (۱ ویال، ۱۵ میلی لیتر): بافری که برای آزادسازی ویتامین D از پروتئین اتصال دهنده آن (ویتامین D باندینگ پروتئین) آماده استفاده است.
- توجه: بلافاصله پس از برداشتن محلول مورد نیاز درب ویال را ببندید تا از تبخیر جلوگیری شود.
- آنزیم مزدوج (محلول غلیظ ۲۰ X ویال، ۵/۱ میلی لیتر): حاوی ۲۵ OH ویتامین-D بیوتینیله است.
- بافر رقیق کننده مزدوج (۲ ویال، ۱۵ میلی لیتر): برای رقیق سازی کنژوگه آنزیم استفاده می شود.
- مجموعه استاندارد (۶ ویال/۲ میلی لیتر): حاوی ۰، ۵، ۱۰، ۳۰، ۶۰ و ۱۲۰ نانوگرم در میلی لیتر ویتامین D 25-OH کالیبره شده بر اساس پروتکل برنامه استانداردسازی ویتامینD (VDSP) توسط مواد مرجع استاندارد NIST (SRM)-972.
- کنترل سرم (۲ ویال، ۲ میلی لیتر): حاوی کنترل های سرمی با غلظت های مشخص ذکر شده بر روی برچسب.
- محلول شستشو (۲ ویال، ۵۰ میلی لیتر، ۲۰ برابر غلیظ): حاوی محلول بافر فسفات با ۰.۰۵% Tween 20 است. برای تهیه شستشو، محلول محلول غلیظ شستشو را به نسبت ۱:۲۰ با آب مقطر رقیق می کند.
- معرف سوبسترای کروموژن (۲ ویال، ۱۲ میلی لیتر): حاوی تترا متیل بنزیدین (TMB) و پراکسید هیدروژن ( آماده استفاده)
- محلول توقف (۲ ویال، ۱۲ میلی لیتر): حاوی ۱ مولار اسید کلریدریک. (محلول آماده مصرف)
مواد/تجهیزات مورد نیاز که همراه با کیت الایزا ویتامین دی پیشتاز طب ارائه نشده است:
- الایزا ریدر میکروپلیت با قابلیت جذب طول موج ۴۵۰ نانومتر (و ۶۳۰ نانومتر).
- میکرو پیپت های دقیقی که می توانند ۱۰ تا ۱۰۰ میکرولیتر را تحویل دهند.
- دستگاه انکوباتور کالیبره شده ۳۷ درجه سانتیگراد
- حوله جاذب
- آب مقطر
موارد عمومی برای کاربران:
- معرف های کیت الایزا ویتامین دی پیشتاز طب را با شماره های مختلف مخلوط نکنید.
- تمام اجزای کیت الایزا ویتامین دی پیشتاز طب باید فقط در کیت اصلی خود استفاده شوند
- تمام معرف های به دست آمده از منابع انسانی برای HBs Ag، آنتی بادی HCV و آنتی بادی HIV منفی هستند. برای جلوگیری از خطر آلودگی، از تجهیزات حفاظت فردی مانند دستکش، روپوش آزمایشگاهی و غیره استفاده کنید و از تماس مستقیم با معرف ها خودداری کنید.
شرایط نگهداری کیت الایزا ویتامین دی پیشتاز طب
- کیت باید هنگام تحویل گرفتن و در صورت عدم استفاده در دمای ˚C2-8 نگهداری شود.
- چاهک های استفاده نشده را در کیسه مهر و موم شده خود با مواد خشک کننده ( نمگیر) نگهداری کنید.
- از معرف های تاریخ مصرف گذشته استفاده نکنید.
- پس از آماده سازی، محلول شستشوی رقیق شده (۱:۲۰) در دمای ۸-۲ درجه سانتی گراد به مدت ۱ هفته پایدار است.
جمع آوری و ذخیره سازی نمونه
این کیت الایزا ویتامین دی پیشتاز طب برای استفاده با نمونه سرم می باشد. نمونه سرم باید از یک نمونه خون کامل تهیه شود.
سرم تازه نمونه انتخابی این کیت است. با این حال، اگر آزمایش را نمی توان ظرف یک ساعت پس از آماده سازی سرم انجام داد، نمونه های سرم را بلافاصله در یخچال (حداکثر ۴۸ ساعت) در یخچال قرار دهید و اجازه دهید قبل از آزمایش به دمای اتاق برگردند. در صورت نیاز به نگهداری طولانی مدت، نمونه ها باید در دمای ۲۰- درجه سانتیگراد (حداکثر ۷ روز) نگهداری شوند. از تکرار چرخه های انجماد و ذوب خودداری کنید.
آماده سازی معرف ها
- تمام معرف ها باید قبل از استفاده به دمای اتاق)۲۲-۲۸ درجه سانتیگراد) برسند.
- روش تست باید به صورت متوالی و بدون وقفه انجام شود.
- محلول شستشوی کار: محلول شستشوی غلیظ ۲۰ برابر را با اضافه کردن آب مقطر قبل از استفاده رقیق کنید (یعنی ۵۰ میلی لیتر محلول شستشو باید به ۱۰۰۰ میلی لیتر رقیق شود). محلول را می توان در دمای ۸-۲ درجه سانتی گراد به مدت یک هفته نگهداری کرد.
- اندازه گیری فتومتریک شدت رنگ باید ظرف ۳۰ دقیقه پس از افزودن محلول stop انجام شود.
- برای حصول بهترین نتیجه، شستشوی چاه ها به طور کامل انجام شود و تمام قطرات باقیمانده با ضربه زدن به صفحه روی کاغذ جاذب پاک شود.
- مدت زمان آزمایش شامل زمان انکوباسیون یکی از عوامل اصلی در حصول بهترین نتایج است. بنابراین، لطفا قبل از اجرای آزمایش، مواد و معرف های مورد نیاز (به جز محلول کار مزدوج) را تهیه کنید تا زمان نمونه برداری کاهش یابد.
- بافر واکنش باید با افزودن حجم مساوی از بافر Assay و بافر Extraction تهیه شود. آزمایش را در عرض ۵ دقیقه پس از آماده سازی انجام دهید.
روش انجام آزمایش:
- تعداد مورد نظر چاهک میکروپلیت را در نگهدارنده محکم کنید و باقیمانده را با ماده خشک کن در یک کیسه اصلی محکم در بسته نگهداری کنید.
- ۲۰ میکرولیتر از هر استاندارد، سرم کنترل و نمونه را در چاهک های مناسب توزیع کنید. توصیه می شود نمونه ها و استانداردها را در دو نسخه اجرا کنید و میانگین OD (چگالی نوری) هر کدام را به عنوان نتیجه نهایی محاسبه کنید.
- ۱۰۰ میکرولیتر از بافر واکنش را به هر چاهک اضافه کنید. به منظور تهیه بافر واکنش در هر چاهک، ۷۵ میکرولیتر بافر استخراج و ۷۵ میکرولیتر بافر سنجش را در یک لوله اضافه کنید و خوب مخلوط کنید.
- میکروپلیت را به مدت ۲ دقیقه به آرامی تکان دهید تا محتویات مخلوط شوند. سپس چاه های میکروتیتر را با سیلر مقوایی بپوشانید. آن را به مدت ۴۵ دقیقه در انکوباتور ۳۷ درجه سانتیگراد انکوبه کنید.
- نکته مهم: به تکان دادن پلیت ادامه دهید تا محتویات چاهک ها کاملاً مخلوط شوند تا رنگی یکدست به دست آید. برای تکان دادن میکروپلیت با سرعت ۵۰۰ دور در دقیقه به مدت ۲ دقیقه می توان از شیکر صفحه استفاده کرد.
- پس از زمان انکوباسیون، محتویات چاهک ها را با تکان دادن میکروپلیت در ظرف زباله خارج کنید. چاهک های میکروتیتر را ۵ بار بشویید و تکان دهید (هر بار با ۳۰۰ میکرولیتر محلول شستشو). چاهک ها را به شدت روی کاغذ جاذب یا دستمال کاغذی بزنید تا تمام قطرات باقیمانده محلول شستشو از بین برود. (از هر گونه زمان خیساندن در مرحله شستشو خودداری کنید)
- ۱۰۰ میکرولیتر از معرف کار مزدوج را در هر چاهک به جز چاهک خالی بریزید. برای تهیه معرف مزدوج کار، رقیق کنید. کنژوگه آنزیم غلیظ ۱:۲۰ با رقیق کننده مزدوج، (برای هر نوار ۵۰ میکرولیتر محلول کنژوگه غلیظ را به ۹۵۰ میکرولیتر بافر رقیق کننده مزدوج اضافه کنید و خوب مخلوط کنید.) برای جلوگیری از کاهش مقدار O.D، تهیه مزدوج توصیه می شود. پس از اتمام اولین زمان انکوباسیون بافر کار می کند.
- چاهک های میکروتیتر را با سیلر مقوایی بپوشانید و به مدت ۱۵ دقیقه در انکوباتور ۳۷ درجه سانتیگراد انکوبه کنید.
- پس از زمان انکوباسیون، محتویات چاهک ها را با تکان دادن میکروپلیت در ظرف زباله خارج کنید. چاهک های میکروتیتر را ۵ بار بشویید و تکان دهید (هر بار با ۳۰۰ میکرولیتر محلول شستشو). (از هر گونه زمان خیساندن در مرحله شستشو خودداری کنید). چاهک ها را به شدت روی کاغذ جاذب یا دستمال کاغذی بزنید تا تمام قطرات باقیمانده محلول شستشو از بین برود.
- ۱۰۰ میکرولیتر محلول سوبسترای کروموژن را در هر چاهک بریزید.
- میکروپلیت را به مدت ۱۵ دقیقه در دمای اتاق و در تاریکی انکوبه کنید.
- ۱۰۰ میکرولیتر محلول stop را به چاهک اضافه کنید تا واکنش متوقف شود. خواندن جذب در ۴۵۰ نانومتر توسط الایزا ریدر. (در صورت موجود بودن از فیلتر ۶۳۰ نانومتری به عنوان فیلتر مرجع استفاده کنید)
محاسبه نتایج
- مقدار متوسط جذب استانداردها و نمونه ها را در ۴۵۰ نانومتر محاسبه کنید (در صورت موجود بودن از فیلتر ۶۳۰ نانومتری به عنوان فیلتر مرجع استفاده کنید).
- یک منحنی استاندارد نقطه به نقطه با رسم میانگین جذب به دست آمده برای هر استاندارد مرجع در برابر غلظت آن بر حسب ng/ml بر روی کاغذ گراف خطی، با جذب در محور عمودی (Y) و غلظت در محور افقی (X) بسازید..
- از مقدار میانگین جذب برای هر نمونه استفاده کنید. غلظت متناظر ۲۵-OHVitamin D را بر حسب ng/ml از منحنی استاندارد تعیین کنید.
- نتایج یک منحنی استاندارد معمولی ELISA 25-OH-Vitamin-D در جدول ۱ نشان داده شده است.
جدول ۱: مثالی از منحنی استاندارد
جذب متوسط (۴۵۰-۶۳۰ nm ) | استاندارد ها (ng/ml) | |
۵/۲ | ۰ | St1 |
۲۶/۱ | ۵ | St2 |
۹۷/۰ | ۱۰ | St3 |
۵۸/۰ | ۳۰ | St4 |
۳۴/۰ | ۶۰ | St5 |
۱۸/۰ | ۱۲۰ | St6 |
جداول شماره ۱: تحلیل کیت الایزا ویتامین دی پیشتاز طب (ویتامین د۳ کوله کلسیفرول)
نکته ۱: مثال صرفاً برای توضیح است و نباید برای محاسبه مجهولات استفاده شود. کاربران باید منحنی استاندارد خود را در هر اجرا بدست آورند.
نکته ۲: مقادیر بیشتر از ng/ml 120 باید بیش از ۱۲۰ ng/ml گزارش شود.
مقادیر مورد انتظار:
هر آزمایشگاه باید محدوده نرمال خود را بر اساس جمعیت بیمار تعیین کند. بر اساس تعداد محدودی از نمونه های خون بالغ سالم، میانگین غلظت ۲۵ OH ویتامین-D در جدول بعد از صفحه نشان داده شده است.
جدول ۲: مقدار مورد انتظار ۲۵ OH-Vitamin-D
محدوده (ng/ml) | سطح |
۲۰˂ | بسیار کم |
۲۰-۲۹ | ناکافی |
۳۰-۱۰۰ | مناسب و کافی |
۱۰۰˃ | بصورت بالقوه سمی |
جداول شماره ۲: تحلیل کیت الایزا ویتامین دی پیشتاز طب (ویتامین د۳ کوله کلسیفرول)
تبدیل واحد برای مقادیر ۲۵ OH-Vitamin-D
فرمول زیر را می توان برای تبدیل واحد غلظت ۲۵ OH ویتامین-D به nmol/L استفاده کرد:
ng/ml × ۲.۵ = nmol/L
مثال:
مقدار ۲۵ نانوگرم در میلی لیتر پس از اعمال فرمول فوق ۶۲.۵ نانومول بر لیتر است.
محدودیت های آزمون
سطح ۲۵ OH ویتامین D نباید به عنوان یک شاخص مطلق وجود یا عدم وجود بیماری استفاده شود.
نتایج آزمایش تنها باید در ترکیب با سایر تست های آزمایشگاهی و روش های تشخیصی در روند نظارت بر درمان بیمار تفسیر شود.
تکان دادن ناکافی صفحه برای مخلوط کردن محتویات آن (بافر واکنش) باعث تغییر در نتیجه می شود.
به دلیل وجود آنتی بادی های هتروفیل در سرم برخی از بیماران، با وجود مواد مسدود کننده قوی ضد هتروفیل در محلول های کیت الایزا ویتامین دی پیشتاز طب ، امکان تداخل در آزمایش وجود خواهد داشت.
از استفاده از نمونه های همولیز شده خودداری کنید.
ویژگی های عملکردی
۱. حساسیت
حداقل غلظت قابل تشخیص ۲۵ OH-Vitamin-D با چگالی نوری (OD) استانداردهای صفر منهای سه برابر انحراف استاندارد (SD) تعیین شد.
حساسیت کیت الایزا ویتامین دی پیشتاز طب ۲۵ OH-Vitamin-D 3.5 ng/ml است و مقادیر کمتر از این مقدار باید <3.5ng/ml گزارش شود.
۲. دقت
۲-۱ Intra-assay
Intra-assay با تکرار تعیین سه نمونه سرم مختلف با غلظت شناخته شده در یک اجرا مشخص شد.
CV% | SD | میانگین (ng/ml) | تعداد تست های انجام شده | شماره نمونه |
۲/۱۴ | ۷/۱ | ۱۲ | ۱۰ | ۱ |
۱/۴ | ۲۱/۲ | ۵۴ | ۱۰ | ۲ |
۲/۲ | ۲۸/۲ | ۱۰۴ | ۱۰ | ۳ |
جداول شماره ۳: تحلیل کیت الایزا ویتامین دی پیشتاز طب (ویتامین د۳ کوله کلسیفرول)
۲-۲ Inter-assay
Inter-assay با تکرار اندازه‌گیری‌های سه نمونه سرم مختلف با غلظت شناخته شده در ۲۴ اجرا مختلف تعیین شد.
CV% | SD | میانگین (ng/ml) | تعداد تست های انجام شده | شماره نمونه |
۷/۱۶ | ۷۱/۱ | ۱۰.۲۶ | ۲۴ | ۱ |
۱۱ | ۶۶/۳ | ۳۳.۲۶ | ۲۴ | ۲ |
۴/۳ | ۸/۳ | ۱۱۲ | ۲۴ | ۳ |
جداول شماره ۴: تحلیل کیت الایزا ویتامین دی پیشتاز طب (ویتامین د۳ کوله کلسیفرول)
۳. اختصاصیت
ویژگی این تست الایزا ۲۵ OH-Vitamin-D با افزودن متابولیت های مختلف ویتامین D به نمونه های سرم تعیین شد. نتایج واکنش های متقاطع در جدول زیر نشان داده شده است.
واکنش متقابل % | غلظت (ng/ml) | واکنش دهنده های متقاطع |
۱۰۰ | ۱۰ | ۲۵-OH-Vitamin-D3 |
۱۰۰ | ۱۰ | ۲۵-OH-Vitamin-D2 |
۹.۵ | ۱۰۰ | ۱, ۲۵-OH-Vitamin-D3 |
۶ | ۷۰ | ۱, ۲۵-OH-Vitamin-D2 |
˂۰.۱ | ۲۵ | Vitamin-D3 |
۰.۵˂ | ۲۰ | Vitamin-D2 |
۳.۵ | ۵۰ | ۲۴, ۲۵-OH-Vitamin-D3 |
۵ | ۲۰ | ۳- epi-25-OH-VitaminD2 |
۱.۵ | ۲۰ | ۳- epi-25-OH-VitaminD3 |
جداول شماره ۵: تحلیل کیت الایزا ویتامین دی پیشتاز طب (ویتامین د۳ کوله کلسیفرول)
۴. بازیابی
مقادیر مشخصی از۲۵ OH-Vitamin-D به ۴ سرم مختلف با غلظت های شناخته شده۲۵ OH-Vitamin-D اضافه شد و بازیابی آنها تعیین شد. نتایج در جدول بعد از صفحه نشان داده شده است:
بازیابی% | مقدار مشاهده شده (ng/ml) | مقدار مورد انتظار (ng/ml) | افزوده شدن ۲۵OHVitaminD | ۲۵OHVitaminD در سرم | شماره نمونه |
۹۵.۲ | ۱۱.۹ | ۱۲.۵ | ۱۰ | ۱۵ | ۱ |
۹۵ | ۱۹ | ۲۰ | ۲۵ | ۱۵ | ۱ |
۹۵.۲ | ۴۰.۵ | ۴۲.۵ | ۷۰ | ۱۵ | ۱ |
۱۰۴.۱ | ۲۵ | ۲۴ | ۱۰ | ۳۸ | ۲ |
۱۰۱.۵ | ۳۲ | ۳۱.۵ | ۲۵ | ۳۸ | ۲ |
۱۰۴.۶ | ۵۶.۵ | ۵۴ | ۷۰ | ۳۸ | ۲ |
۹۷.۱ | ۳۳.۵ | ۳۴.۵ | ۱۰ | ۵۹ | ۳ |
۹۵.۲ | ۴۰ | ۴۲ | ۲۵ | ۵۹ | ۳ |
۹۶.۱ | ۶۲ | ۶۴.۵ | ۷۰ | ۵۹ | ۳ |
۱۰۴.۴ | ۵۹.۵ | ۵۷ | ۱۰ | ۱۰۴ | ۴ |
۱۰۲.۳ | ۶۶ | ۶۴.۵ | ۲۵ | ۱۰۴ | ۴ |
۱۰۴.۶ | ۹۱ | ۸۷ | ۷۰ | ۱۰۴ | ۴ |
جداول شماره ۶: تحلیل کیت الایزا ویتامین دی پیشتاز طب (ویتامین د۳ کوله کلسیفرول)
۵. خطی بودن
برای بررسی خطی بودن آزمون، پنج نمونه سرم مختلف با غلظت مشخص ۲۵-OH-ویتامین-D با صفر استاندارد (st.0) رقیق شده و توسط این کیت الایزا ویتامین دی پیشتاز طب مورد آزمایش قرار گرفتند. نتایج در جدول زیر نشان داده شده است:
بازیابی% | نمونه رقیق نشده ۲۵OH-Vitamin-D | شماره نمونه | |||
۱:۱۶ | ۱:۸ | ۱:۴ | ۱:۲ | ||
* | * | ۱۰۸ | ۱۱۰ | ۱۸.۳ | ۱ |
* | ۹۷ | ۹۳ | ۹۲ | ۳۷.۳ | ۲ |
۸۹ | ۹۲ | ۱۱۱ | ۹۸ | ۵۸.۹ | ۳ |
۱۱۵ | ۱۰۸ | ۱۰۶ | ۱۰۳ | ۹۵ | ۴ |
۱۱۶ | ۹۲ | ۱۰۳ | ۱۰۴ | ۱۱۲ | ۵ |
جداول شماره ۷: تحلیل کیت الایزا ویتامین دی پیشتاز طب (ویتامین د۳ کوله کلسیفرول)
* قابل اجرا نیست (زیر حد تشخیص)
جهت تست ویتامین د۳ کوله کلسیفرول، استفاده از کیت الایزا ویتامین دی پیشتاز طب توصیه می گردد.
تستا عرضه کننده انواع کیت های آزمایشگاهی و لوازم مصرفی آزمایشگاهی و کیت الایزا ویتامین دی پیشتاز طب
- Pittas AG, Chung M, Trikalinos T, Mitri J, Brendel M, Patel K, Lichtenstein AH, Lau J, Balk EM; Chung; Trikalinos; Mitri; Brendel; Patel; Lichtenstein; Lau; Balk (Mar 2010)."Vitamin D and Cardiometabolic Outcomes: A Systematic Review". Annals of internal medicine 152 (5): 307–۱۴. doi:10.7326/0003-4819-152-5-201003020- 00009.PMC 3211092. PMID 20194237 Long-Term High-Dose Vitamin D3 Supplementation and Blood Pressure in Healthy Adults | Hypertension (ahajournals.org)
- Joseph AJ, George B, Pulimood AB, Seshadri MS, Chacko A. 25 (OH) vitamin D level in Crohn's disease: association with sun exposure & disease activity. Indian J Med Res 130 (2009) 133-137
- ROSS AC, TAYLOR CL, YAKTINE AL, DEL VALLE HB, eds. Committee to Review Dietary Reference Intakes for Vitamin D and Calcium, Institute of Medicine, Food and Nutrition Board. Dietary Reference Intakes for Calcium and Vitamin D. Washington, DC: National Academy Press (2010)
- TAYLOR CL, PATTERSON KY, ROSELAND JM, WISE SA, MERKEL JM, PEHRSSON PR, YETLEY EA. Including food 25-hydroxyvitamin D in intake estimates may reduce the discrepancy between dietary and serum measures of vitamin D status. J Nutr 2014; 144:654-9
الایزا
کیت های بیوشیمی
کیت های مولکولی و سایر
کیت های دامپزشکی
کیت های زیبایی
تجهیزات آزمایشگاهی
کیت های تشخیص سریع
مصرفی
Reviews
There are no reviews yet.