Description
علائم، تشخیص و درمان بیماری ادرار شربت افرا
MSUD
فهرست مطالب
کیت شربت افرا
کاربرد: جهت تشخیص بیماری ادرار شربت افرا با اندازه گیری لوسین و اسید های آمینه شاخه دار در خون نوزادان.
تستا عرضه کننده مواد مصرفی بهداشتی و آزمایشگاهی و کیت MSUD
برند: بهار افشان
محتویات کیت شربت افرا:
پلیت استخراج، پلیت شفاف فتومتری، معرف های شماره ۱ تا ۴ ، محلول رنگزا و نوار های کاغذ صافی با لکه های خونی استاندارد
قیمت : ۴۰۵۰۰۰ تومان
بیماری ادرار شربت افرا
Maple Syrup Urine Disease ( MSUD)
بیماری ادرار شربت افرا (MSUD) یک اختلال متابولیک تهدید کننده زندگی است. طی اختلالات متابولیک بدن شما نمی تواند به طور طبیعی کار کند زیرا نمی تواند غذا را به درستی به انرژی تبدیل کند تا بدن شما سالم بماند.
پروتئین برای عملکرد طبیعی بدن مورد نیاز است. پروتئین ها از ۲۰ نوع اسید آمینه مختلف ساخته شده اند. پروتئین ها باید تجزیه شوند (متابولیز شوند) تا جذب بدن شوند و مورد استفاده قرار گیرند. افراد مبتلا به MSUD آنزیم های مورد نیاز را ندارند (یا اصلا آنزیم های خاص را ندارند یا آنزیم های خاص را دارند اما فعالیت ندارند، یا به اندازه کافی آنزیم خاص ندارند) تا سه آمینو خاص لوسین، ایزولوسین و والین را تجزیه کنند.
خطر بروز MSUD برای مردان و زنان یکسان است.بیماری ادرار شربت افرا ناشی از جهش در یکی از سه ژن BCKDHA، BCKDHB یا DBT است. این ژن ها به بدن انسان دستور می دهند تا آنزیم هایی (آنزیم های پیچیده BCKDH) را بسازد که برای تجزیه اسیدهای آمینه ضروری هستندجهش در سه ژن منجر به کاهش یا عدم فعالیت آنزیم ها می شود.
در MSUD، بدن فاقد آنزیمی به نام BCKDC (مجموعه آلفا کتو اسید دهیدروژناز با زنجیره شاخه‌ای) است. آنزیم BCKDC سه اسید آمینه مهم را پردازش می کند: لوسین، ایزولوسین و والین که BCAA (اسیدهای آمینه شاخه دار) نیز نامیده می شوندBCAA. در غذاهای غنی از پروتئین مانند گوشت، تخم مرغ و شیر یافت می شود.
از آنجایی که افراد مبتلا به MSUD نمی توانند این سه آمینو اسید را تجزیه کنند، این اسیدهای آمینه در بدن تجمع می یابند، برای بدن سمی می شوند و باعث مشکلات سلامتی شدید می شوند. بدون مدیریت پزشکی، بیماری ادرار شربت افرا می تواند منجر به طیف گسترده ای از ناتوانی های ذهنی و جسمی و مرگ شود.
مسیر کاتابولیک BCAA
BCAA ها تحت ترانس آمیناسیون قرار می گیرند که توسط آمینوترانسفراز با زنجیره شاخه ای (BCAT) کاتالیز می شود و به α-کتوگلوتارات نیاز دارد که منجر به تولید آلفا کتواسیدهای KIC، KMV و KIV می شود. سپس این واسطه ها تحت دکربوکسیلاسیون اکسیداتیو قرار می گیرند که توسط کمپلکس BCKAD کاتالیز می شود.
انواع بیماری ادرار شربت افرا (MSUD)
چهار نوع اصلی MSUD عبارتند از:
(Classic) کلاسیک:
بیماری ادرار شربت افرا کلاسیک شدیدترین و رایج ترین نوع MSUD است. علائم معمولاً در سه روز اول تولد ظاهر می شوند. فرد مبتلا به این شکل فعالیت آنزیمی کمی دارد، در صورت وجود، تقریباً ۲ درصد یا کمتر از فعالیت طبیعی. شروع علائم معمولاً زمانی شروع می شود که بدن شیرخوار شروع به پردازش پروتئین حاصل از تغذیه می کند.
(Intermediate) متوسط:
این نوع MSUD شدت کمتری نسبت به MSUD کلاسیک دارد. علائم معمولاً در کودکان بین ۵ ماه تا ۷ سال ظاهر می شود. در ابتدا علائم غیر اختصاصی از جمله مشکلات تغذیه، بی حالی و رشد ضعیف ایجاد می کند که ممکن است تشنج، آسیب مغزی، کما و عوارض تهدید کننده زندگی را بدتر کند. کودکان مبتلا به MSUD متوسط نیز بوی مشخصه شربت افرا را در عرق، ادرار و جرم گوش خود نشان می دهند.
(Intermittent) متناوب:
کودکان مبتلا به MSUD متناوب همانطور که انتظار می رود رشد می کنند تا زمانی که عفونت یا دوره استرس باعث بروز علائم شود. افراد مبتلا به MSUD متناوب معمولاً می توانند سطوح بالاتری از سه اسید آمینه را نسبت به افراد مبتلا به MSUD کلاسیک تحمل کنند. معمولاً رشد و رشد فکری طبیعی دارند و بیشتر آنها می توانند سطوح طبیعی پروتئین را در رژیم غذایی خود مصرف کنند.
(Thiamine-responsive) پاسخ دهنده به تیامین:
این نوع MSUD به درمان با استفاده از دوزهای بالای ویتامین B1 (تیامین) همراه با رژیم غذایی محدود پاسخ می دهد. با درمان، افراد مبتلا به MSUD پاسخگو به تیامین، تحمل بیشتری نسبت به سه اسید آمینه دارند.
بیماری ادرار شربت افرا (MSUD) چقدر شایع است؟
MSUD یک بیماری بسیار نادر است. از هر ۱۸۵۰۰۰ تولد در ۱ مورد در سراسر جهان رخ می دهد. این بیماری بیشتر در جمعیت هایی با یک خزانه ژنی کوچک یا زمانی که پسرعموها و سایر بستگان نزدیک ازدواج خویشاوندی دارند و بچه دار می شوند ظاهر می شود. حدود ۲۰۰۰ نفر در ایالات متحده به MSUD مبتلا شده اند. این بیماری مردان و زنان را به طور مساوی تحت تأثیر قرار می دهد. اعتقاد بر این است که MSUD 1 نفر از هر ۳۸۰ نفر در جمعیت منونیت قدیم و ۱ در ۲۶۰۰۰ در جمعیت یهودی اشکنازی را تحت تاثیر قرار می دهد.
چه کسانی به بیماری ادرار شربت افرا (MSUD) مبتلا می شوند؟
MSUD می تواند هر کسی را مبتلا کند، اما افرادی که والدین آنها خویشاوند نزدیکی دارند، بسیار بیشتر در معرض ابتلا به این بیماری متابولیک هستند. به همین دلیل، MSUD اغلب در میان منونیت ها (یکی از اعضای یک فرقه پروتستانی) در ایالات متحده رخ می دهد، جایی که افراد یک جمعیت اغلب با یکدیگر ازدواج می کنند. MSUD در ۱ مورد از هر ۳۸۰ تولد در جمعیت منونیت رخ می دهد.
علائم و علل بیماری
چگونه افراد به بیماری ادرار شربت افرا (MSUD) مبتلا می شوند؟
MSUD از طریق خانواده ها به ارث می رسد (انتقال می یابد). یک کودک زمانی با MSUD متولد می شود که والدین هر دو ناقل سه جهش ژنی خاص (تغییرات) باشند و فرزند آنها نسخه هایی از این ژن های تغییر یافته را به ارث ببرد – یک نسخه از هر والدین. والدینی که یک ژن تغییر یافته دارند هیچ علامتی ندارند، اما می توانند این ژن را به فرزندان خود منتقل کنند. MSUD به عنوان یک الگوی اتوزومال مغلوب به ارث می رسد، به این معنی که هر دو والدین باید ژن جهش یافته را حمل کنند تا فرزندی با MSUD داشته باشند.
هر فرد دارای دو نسخه از هر ژن است. فرد ناقل MSUD سالم است اما حامل جهش در یکی از دو نسخه ژن است. زمانی که دو والدین ناقل با هم فرزندی داشته باشند، در هر بارداری ۲۵ درصد شانس داشتن فرزندی با این اختلال را دارند. هنگامی که دو والدین حامل ژن مغلوب BCKDC هستند، ممکن است یکی از فرزندان آنها به این بیماری مبتلا شود و فرزندان دیگر به آن مبتلا نباشند.
با این حال، این کودکان ۵۰ درصد شانس ناقل بودن را دارند. آنها همچنین ممکن است در آینده در زندگی با خطر داشتن فرزند مبتلا به MSUD همراه باشند. اگر دو ژن طبیعی برای BCKDC دارید، نمی توانید این بیماری را به فرزندان خود منتقل کنید.
اگر پدر و مادر هر دو ناقل باشند، فرزندشان به احتمال زیر مبتلا است:
- ۲۵درصد احتمال دریافت دو ژن جهش یافته و داشتن MSUD
- ۵۰ درصد شانس دریافت تنها یک ژن معیوب و ناقل بودن
- ۲۵ درصد احتمال دریافت یک ژن طبیعی از هر والدین
این جهش ها منجر به فعالیت اندک یا بدون فعالیت آنزیم های مورد نیاز برای تجزیه سه آمینو اسید خاص که در غذاهای غنی از پروتئین هستند، می شود. این سه آمینو اسید خاص لوسین، ایزولوسین و والین هستند. بدون آنزیم های مورد نیاز، سه اسید آمینه و همچنین محصولات جانبی سمی آنها (به نام کتواسید) ساخته می شوند. این منجر به مشکلات جدی سلامتی می شود که در MSUD دیده می شود.
MSUD بیشتر در جوامعی رخ می دهد که تنوع ژنتیکی کمی دارند (مانند جامعه منونیت در ایالات متحده). این گروه ها دارای تعداد بیشتری از افرادی هستند که ناقل ژن جهش یافته هستند.
علائم بیماری ادرار شربت افرا (MSUD) چیست؟
علائم MSUD کلاسیک در نوزادان تا ۴۸ ساعت پس از تولد ظاهر می شود. در کودکان بزرگتر، علائم MSUD متوسط، متناوب و پاسخ دهنده به تیامین معمولاً قبل از هفت سالگی ایجاد می شود. هر چهار نوع MSUD دارای علائمی هستند که عبارتند از:
- · ادرار، عرق یا جرم گوش که بویی شبیه شربت افرا یا شکر سوخته می دهد. (این اختلال نام خود را از این علامت رایج گرفته است.) این علائم ممکن است همیشه در همه انواع بیماری وجود نداشته باشد.
- · تغذیه ضعیف، استفراغ، از دست دادن اشتها، تحریک پذیری.
- · تنبلی/ کندی/خستگی و ضعف.
- · تغییرات در تنش عضلانی – تنش عضلانی ضعیف، سفتی/تنش عضلانی
- · حرکات غیرطبیعی عضلات، اسپاسم هایی که باعث قوس عقبی سر، گردن و ستون فقرات می شوند.
- · تاخیر رشد.
- · تشنج، حمله ناگهانی، نارسایی تنفسی و کما (با پیشرفت بیماری).
- · سطح انرژی پایینی دارند و بسیار خواب آلود هستند.
- · بداخلاق یا تحریک پذیر هستند گریه بلندی دارند
تشخیص و آزمایشات
بیماری ادرار شربت افرا (MSUD) چگونه تشخیص داده می شود؟
پزشکان MSUD کلاسیک را با غربالگری نوزاد (آزمایش خون) بلافاصله پس از تولد نوزاد تشخیص می دهند. افراد مبتلا به MSUD متوسط، متناوب یا پاسخ دهنده به تیامین ممکن است علائم بیماری را تا سنین کودکی یا اوایل کودکی نشان ندهند. در این موارد، پزشکان MSUD را با آزمایش خون و با ارزیابی علائم کودک، از جمله یافتن بوی متمایز قند/ افرا در عرق و ادرار او تشخیص میدهند. آزمایش ژنتیکی از گلبول های سفید خون اکنون می تواند به تایید تشخیص و شناسایی انواع MSUD کمک کند.
چگونه بفهمم فرزندم به بیماری ادرار شربت افرا (MSUD) مبتلا است؟
اگر نوزاد یا کودک شما ادرار یا عرق بوی شیرین دارد، باید به اورژانس مراجعه کنید. علائم دیگر عبارتند از ضعف یا تنبلی/خستگی یا کاهش ناگهانی اشتها. فقط یک پزشک می تواند بیماری ادرار شربت افرا را تشخیص دهد.
مدیریت بیماری و درمان
درمان بیماری ادرار شربت افرا (MSUD) چیست؟
پزشکان می توانند MSUD را با کنترل سطح سه آمینو اسید (لوسین، ایزولوسین و والین) در بدن بیمار مدیریت کنند. افراد مبتلا به MSUD باید همیشه از یک رژیم غذایی سخت پیروی کنند که مواد مغذی ضروری را فراهم می کند، اما مقدار سه اسید آمینه را به شدت محدود می کند (افراد برای رشد و تکامل طبیعی به مقدار کمی از این سه آمینو اسید نیاز دارند). MSUD پاسخ دهنده به تیامین را می توان با دوزهای بالای ویتامین B1 (تیامین) و رژیم غذایی سخت مدیریت کرد.
پزشکان افراد مبتلا به MSUD را در طول زندگی خود تحت نظر دارند تا مطمئن شوند که این سه اسید آمینه از سطح تحمل فرد تجاوز نکرده و شروع به ایجاد آسیب نمی کنند. هنگامی که بیماران مبتلا به MSUD مریض می شوند، تب دارند، نمی توانند غذا را به دلیل استفراغ یا اسهال نگه دارند یا وقتی اسیدهای آمینه به سطوح خطرناک افزایش می یابد، بیمار باید فوراً در بیمارستان بستری شود. در بیمارستان، پزشکان ممکن است:
- · گلوکز و انسولین را از طریق ورید (با استفاده از IV) برای تنظیم سطح اسیدهای آمینه در بدن استفاده کنند.
- · از یک لوله تغذیه IV یا لوله ای که از بینی به معده می رسد(از طریق بینی) برای انتقال مواد مغذی خاص، از جمله انواع اسیدهای آمینه ای که فرد می تواند تحمل کند، استفاده می کنند.
- · پلاسمای خون فرد را فیلتر کرده و به بدن او برمی گردانند (روشی به نام هموفیلتراسیون/دیالیز) تا سطح سه اسید آمینه را کاهش دهید.
- · بیمار را از نظر علائم تورم یا عفونت مغزی و تجمع اسید تحت نظر قرار میدهند.
آیا درمان دائمی برای بیماری ادرار شربت افرا (MSUD) وجود دارد؟
از سال ۲۰۰۴، پیوند کبد در درمان افراد مبتلا به MSUD کلاسیک بسیار موفق بوده است. با یک کبد جدید، افراد مبتلا به MSUD می توانند آنزیم های مورد نیاز خود را برای تجزیه سه آمینو اسیدی که در بدن ایجاد می شوند تولید کنند. پس از پیوند کبد، افراد مبتلا به MSUD می توانند رژیم غذایی نامحدود داشته باشند، بدون علائم زندگی کنند و از مشکلات شناختی بیشتر جلوگیری کنند. افراد مبتلا به MSUD هنوز حامل ژن این اختلال هستند و بنابراین هنوز هم می توانند آن را به فرزندان خود منتقل کنند. مشاوره ژنتیک توصیه می شود.
عوارض جانبی درمان بیماری ادرار شربت افرا (MSUD) چیست؟
عوارض جانبی گلوکز و انسولین IV شامل تغییرات در سطح قند خون است. پزشکان این سطوح را از نزدیک در بیمارستان کنترل خواهند کرد تا مطمئن شوند که در محدوده طبیعی باقی می مانند.
عوارض جانبی همودیالیز و هموفیلتراسیون شامل گرفتگی عضلات، فشار خون پایین (هیپوتانسیون) و تغییرات در محتوای الکترولیت خون است که نیاز به نظارت دقیق دارد.
پیوند کبد شامل عوارضی مشابه هر عمل جراحی از جمله خونریزی، عفونت و لخته شدن خون است. پیوند همچنین عوارض بالقوه دیگری را به همراه دارد، از جمله رد عضو و سیستم ایمنی ضعیف (فراتر از آنچه برای جلوگیری از رد عضو لازم است). با درک بهتر از فرآیند پیوند، بیماران می توانند با نظارت خوب و بدون ترس از مشکلات مربوط به MSUD زندگی عادی داشته باشند.
عوارض مرتبط با بیماری ادرار شربت افرا (MSUD) چیست؟
افراد مبتلا به MSUD ممکن است دچار انواع عوارض از خفیف تا شدید شوند. عوارض بیماری ادرار شربت افرا عبارتند از:
- · آسیب مغزی، مشکلات عصبی و تاخیر در رشد.
- · افزایش خطر ابتلا به اختلال نقص توجه/بیش فعالی (ADHD)، اضطراب و افسردگی.
- · از دست دادن توده استخوانی که باعث شکستگی آسان استخوان ها می شود.
- · تورم پانکراس / پانکراتیت، به ویژه در شرایط بحرانی.
- · سردردهای مزمن ناشی از افزایش فشار خون در جمجمه.
- · اختلالات حرکتی مانند لرزش و انقباضات کنترل نشده عضلانی.
- · کما و مرگ ناشی از شرایط بحرانی مانند عفونت، استرس یا کنترل ضعیف رژیم غذایی.
پیشگیری
چگونه می توانید از بیماری ادرار شربت افرا (MSUD) جلوگیری کنید؟
هیچ راهی برای پیشگیری از بیماری ادرار شربت افرا وجود ندارد. با اطمینان از اینکه
همسرتان با شما نسبتی ندارد، می توانید خطر بچه دار شدن با MSUD را کاهش دهید. اگر خواهر و برادر یا سایر بستگان مبتلا به MSUD دارید، باید قبل از بارداری با پزشک خود صحبت کنید تا در مورد احتمال انتقال بیماری به فرزندتان صحبت کند. آزمایش ژنتیک به شما کمک می کند تا ببیند آیا شما ناقل ژنی هستید که باعث ایجاد MSUD می شود یا خیر.
علائم ممکن است به طور ناگهانی در هر زمانی، معمولاً پس از موارد زیر، عود کند:
- · عفونت
- · برای مدت طولانی غذا نمی خورد (روزه می گیرد).
- · آسیب یا استرس (چه جسمی یا روانی) را تجربه می کند.
- · رژیم غذایی خود را تغییر داده یا از رژیم غذایی توصیه شده پیروی نمی کند.
- · هنگامی که یک حمله متابولیک رخ می دهد، افراد مبتلا به MSUD باید فورا به دنبال مراقبت های پزشکی باشند. مراقبت فوری می تواند خطر آسیب مغزی و سایر عوارض را کاهش دهد. با پزشک خود در مورد امکان پیوند کبد صحبت کنید.
علائم ممکن است به طور ناگهانی در هر زمانی، معمولاً پس از موارد زیر، عود کند:
- · عفونت
- · برای مدت طولانی غذا نمی خورد (روزه می گیرد).
- · آسیب یا استرس (چه جسمی یا روانی) را تجربه می کند.
- · رژیم غذایی خود را تغییر داده یا از رژیم غذایی توصیه شده پیروی نمی کند.
هنگامی که یک حمله متابولیک رخ می دهد، افراد مبتلا به MSUD باید فورا به دنبال مراقبت های پزشکی باشند. مراقبت فوری می تواند خطر آسیب مغزی و سایر عوارض را کاهش دهد. با پزشک خود در مورد امکان پیوند کبد صحبت کنید.
اسامی دیگر این بیماری
- BCKD deficiency ( کمبود BCKD)
- Branched-chain alpha-keto acid dehydrogenase deficiency(کمبود آلفا کتو اسید دهیدروژناز با زنجیره شاخه ای)
- Branched-chain ketoaciduria (کتواسیدوری با زنجیره شاخه ای)
Ketoacidemia (کتواسیدمی) - MSUD
- Neonatal MSUD
آزمایش با کیت شربت افرا (کیت MSUD)
اندازه گیری لوسین و اسید های آمینه شاخه دار در خون نوزادان
در اولین واکنش سنجش غربالگری MSUD نوزادان، آنزیمی به نام لوسین دهیدروژناز(LeuDH)، BCAAهای موجود در نمونه را به اسید α-کتوایزوکاپروات و NADH تبدیل می کند. NADH به وجود آمده در این واکنش همزمان اندیکاتور را احیا کرده و به رنگ صورتی مایل به قرمز تبدیل می کند. این تغییر رنگ در طول موج ۴۹۰ نانومتر اندازه گیری می شود.
کیت شربت افرا و یا کیت MSUD در تشخیص بیماری ادرار شربت افرا قابل اعتماد و و مطمئن می باشد.
روش تهیه و نگهداری نمونه
سنجش والین لوسین و ایزولوسین روی لکه خونی که از پاشنه پای نوزاد تهیه و بر کاغذ صافی مخصوص “کارت گاتری” S&S NO 903 خشک می شود انجام می گیرد. خونگیری معمولا در فاصله ۲۴ تا ۷۲ ساعت بعد از تولد به ترتیب زیر و براساس روش استانداردی که توسط کمیته ملی استاندارد آزمایشگاه های بالینی (NCCLS) ارائه شده است انجام می گیرد. برای این منظور خون مورد نیاز از حاشیه کناری پاشنه پای نوزاد تهیه می شود.
- پاشنه را با یک دستمال یا حوله ولرم ( حرارت ۴۰ تا ۴۱ درجه) گرم کنید تا جریان خون در محل افزایش یابد.
- محل لانست و اطراف آن را با ایزوپروپانول ۷۰ درصد پاک نموده و صبر کنید تا در جریان هوا کاملا خشک شود
- با استفاده از دستکش استریل یک بار مصرف و به کمک یک لانست که طول سوزن آن حداکثر ۴/۲ میلی متر تجاوز نکند، ضربه یکنواخت و آرامی به موضع خونگیری وارد کنید تا خون به راحتی جاری شود.
- قطره اول را با گاز استریل تمیز نموده و سپس فشارهای متناوب و مختصری که به پاشنه وارد می شود، قطره بزرگی شکل می گیرد. کاغذ صافی را به قطره خون نزدیک کرده و آن را به مرکز دایره بچکانید با یک تکنیک صحیح می توان چهار دایره روی کاغذ صافی را پر نمود. توجه کنید که سطح دوایر خونی به هیچ وجه با دست، حتی با دستکش لمس نشود. همچنین مراقب باشید که در هنگام خونگیری هیچ خراش یا پارگی روی کاغذ به وجود نیاید.
- کارت خونی را به صورت افقی روی پایه ای مسطح قرار دهید، به طوریکه لکه خون با جایی تماس پیدا نکند. تقریبا ۳ ساعت صبر کنید تا لکه های خون در دمای ۱۵-۲۵ درجه اتاق کاملا خشک شود. در این مدت از قرار دادن کارت های خونی در جریان هوای آلوده به دود و گرد و غبار و همچنین ااز گذاشتن آنها در معرض حرارت و تابش مستقیم خورشید جدا خودداری کنید.
- هریک از نمونه ها را جداگانه و به ضمیمه فرم مشخصات نوزاد در پاکتی قرار دهید. احتیاط کنید که خون یک نمونه با خون نمونه دیگر در تماس نباشد. بدین ترتیب جابه جایی و حمل و نقل نمونه های خون به آزمایشگاه بدون آسیب دیدگی انجام می گیرد.
- کارت های خونی را می توان برای یک هفته در پاکت های مقاوم به رطوبت نگهداری نمود. لکه های خون در پاکت های پلاستیکی زیپدار و حاوی سیلیکا ژل در دمای ۴-۸ درجه یخچال تا دو ماه و در فریزر (۲۰- درجه) به مدت طولانی پایدار خواهد ماند. نمونه های کنترل و استاندارد را نیز باید در پاکتهای آلومینیومی مخصوص خود که در داخل کیت قرار داده شده است حفظ نمود تا کیفیت آن ها در طول مدت کاربری صدمه نبیند.
محتویات کیت:
پلیت استخراج ( میکروپلیت ۹۶ خانه مخصوص استخراج اسیدآمینه های شاخه دار از لکه خون خشک شده)
۱ عدد
پلیت شفاف فتومتری (میکروپلیت ۹۶ خانه)
۱ عدد
معرف شماره ۱ ، تامپون استخراج (Extraction Buffer)
۲۰ میلی لیتر
معرف شماره ۲ ، سوبسترا
۵ میلی لیتر
معرف شماره ۳، آنزیم لوسین دهیدروژناز در محیط تامپونه
۵ میلی لیتر
معرف شماره ۴، محلول رنگزا
۵ میلی لیتر
نوار های کاغذ صافی با لکه های خونی استاندارد حاوی پنج غلظت و لکه های خونی جهت کنترل (لکه کنترل) در دو غلظت در محدوده غلظت نرمال و آنرمال، خشک شده بر کاغذ صافی مخصوص
دو عدد
معرف ها در یخچال ۴-۸ درجه تا تاریخ مصرف (قید شده در برچسب) پایدار باقی می ماند.
خرید آنلاین کیت شربت افرا (کیت MSUD) در تستا شاپ – «مطمئن خرید کنید»
روش کار:
۱- یک دیسک خونی به قطر ۵ میلی متر از نمونه های بیمار، کنترل و استاندارد را به درون حفره های میکروپلیت ” مخصوص استخراج ” بیاندازید۔ بهتر است که هر نمونه به صورت دوبله آزمایش شود. پایه ای مناسب در داخل بن ماری قرار دهید ( جا لوله ایی که بطور واژگون در داخل بن ماری قرار داده شده و از سطح آب بالاتر می باشد.) بن ماری را روشن نموده پس از رسیدن دمای آب داخل بن ماری به ۹۰-۹۵ درجه , پلیت حاوی نمونه ها، کنترل و استاندارد ها را بر روی پایه داخل بن ماری قرار دهید، درب بن ماری را به آرامی ببندید.
نکته :(مراقب باشید که قطرات آب به داخل حفره ها نچکد ) ۱۰ دقیقه صبر کنید تا لکه خون بر کاغذ تثبیت شود.
۲- به هریک از حفره ها ۱۵۰ میکرولیتر از معرف شماره (۱) ” تامپون استخراج ” بریزید تا والین، لوسین و ایزولوسین خون وارد محیط شود. دقت کنید که تامپون روی دیسکها را کاملا بپوشاند و از تشکیل حباب هوا در حفره ها جلوگیری شود.
۳- روی پلیت را با سرپوش مخصوص ( چسب پلیت ) بپوشانید و مدت۶۰ دقیقه با سرعت مناسب با شیکر نوسانی تکان دهید۔ (در صورتیکه عمل تثبیت لکه در مرحله اول بدرستی انجام شده باشد محلول استخراج کاملا شفاف دیده می شود)
۴- ۱۰۰ میکرولیتر از محلول استخراج شده از نمونه ها را به حفره های هم شماره خود در میکروپلیت شفاف منتقل کنید۔
۵- متناسب با نیاز، حجم مساوی از معرف ۲ و ۳ و ۴ را مخلوط کنید.
این مخلوط فقط ۵ دقیقه پایدار می باشد۔
۶- ۱۵۰ میکرولیتر از این مخلوط را به درون هر حفره بریزید.
۷- روی پلیت را پوشانده و به مدت ۶۰ دقیقه با سرعت مناسب ، با شیکر نوسانی تکان دهید تا واکنش تکمیل شود.
۸- جذب نوری را در فاصله ۱۰ دقیقه در طول موج ۴۹۰ نانومتر ( فیلتر رفرانس ۶۳۰ نانومتر) اندازه گیری کنید.
محاسبه نتیجه آزمایش:
با رسم منحنی استاندارد ( غلظت در مقابل جذب نوری) ، نمونه های مجحول را تعیین مقدار کنید
محدوده طبیعی (حد رفرانس):
غلظت طبیعی لوسین در نمونه خون نوزاد سالم کمتر از ۴ mg/dl می باشد.
جهت تایید نهایی بیماری شربت افرا در نوزاد باید اندازه گیری کمی اسید های آمینه لوسین و ایزولوسین و والین به روش HPLC انجام گیرد. از نوزادانی که لوسین آنها بیش از حد طبیعی است، باید خونگیری تجدید و آزمایش تکرار شود.
نکته: لازم است که برای هر سری آزمایش با کیت MSUD، منحنی استاندارد جدیدی رسم و نمونه های بیمار با آن مقایسه گردد.
کارایی کیت شربت افرا:
- دقت (Precision):
- دقت درون سیستمی (Intra assay precision)
حاصل از انجام ۲۰ تست تکراری برای دو غلظت مختلف ۴.۷ mg/dl و ۸.۵ mg/dl به صورت زیر می باشد.
غلظت مورد انتظار
±SD
CV %
۴.۷ mg/dl
۰.۴
۹
۸.۵ mg/dl
۰.۱
۴.۵
- دقت بین سیستمی (Inter assay precision):
نتایج حاصل از ۸ بار تکرار دوبله در غلظت های معین ۱mg/dl و ۶ mg/dl به صورت زیر می باشد.
غلظت مورد انتظار
±SD
CV %
۴.۷ mg/dl
۰.۵
۱۱.۸
۸.۵ mg/dl
۰.۹
۱۰.۸
- National Organization for Rare Disorders. Maple Syrup Urine Disease. (https://rarediseases.org/rare-diseases/maple-syrup-urine-disease/) Accessed 11/14/2019.
- MSUD Family Support Group. Introduction: What is MSUD? (http://www.msud-support.org/introduction) Accessed 11/14/2019.
- National Institutes of Health. U.S. National Library of Medicine. Maple syrup urine disease. (https://ghr.nlm.nih.gov/condition/maple-syrup-urine-disease) Accessed 11/14/2019.
- Strauss KA, Puffenberger EG, Morton DH. Maple Syrup Urine Disease. (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK1319/) In: Adam MP, Ardinger HH, Pagon RA, et al, eds. GeneReviews® [Internet]. Seattle (WA): University of Washington, Seattle; 1993-2019. Accessed 11/14/2019.
- Feier FH et al. Successful domino liver transplantation in maple syrup urine disease using a related living donor. (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4086180/) Braz J Med Biol Res. 2014 Jun;47(6):522-6. Accessed 11/14/2019.
- Carecchio M et al. Movement disorders in adult surviving patients with maple syrup urine disease. (https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC4235248/) Mov Disord. 2011 Jun;26(7):1324-8. Accessed 11/14/2019
- History and overview of newborn screening. (n.d.). Retrieved from
genes-r-us.uthscsa.edu/resources/newborn/overview.htm
الایزا
کیت های بیوشیمی
کیت های مولکولی و سایر
کیت های دامپزشکی
کیت های زیبایی
تجهیزات آزمایشگاهی
کیت های تشخیص سریع
مصرفی
testa_admin –
سلام
لطفاً تجربیات و نظرات خود را در خصوص کیت شربت افرا (کیت MSUD) را با ما به اشتراک گذارید. از تجربیات ارزشمند شما سپاسگزار خواهیم بود.
شرکت توسعه سلامت توان آفرین – تستا
ماهان –
ممنون از سایت بی نظیر و مطالب پر محتوا
testa_admin –
سپاس از لطف شما – تستا