Name: کیت کالپروتکتین BIOHIT | تست کالپروتکتین بایوهیت - تستا
Brand: biohit
SKU: CALPRO-B-96
Availability: InStock
Rating: 5.00 (2 reviews)

Description

بیماری التهابی روده IBD

معرفی تست کالپروتکتین بایوهیت و بیماری التهابی روده IBD

BIOHIT Calprotectin ELISA

تستا، جهت اندازه گیری سطح کالپروتکتین و تشخیص بیماری التهابی روده IBD، کیت کالپروتکتین BIOHIT را معرفی می کند.

تست کالپروتکتین بایوهیت دقیق و مطمئن توسط تستا توزیع می گردد.

فروش کیت کالپروتکتین BIOHIT

کاربرد: اندازه گیری کمی کالپروتکتین در نمونه های مدفوع و کمک به تشخیص بیماری های روده ای.

مواد مصرفی، فراورده های آزمایشگاهی و انواع کیت های آزمایشگاهی و مواد و لوازم مصرفی در تستا

برند: بایوهیت (BIOHIT)

تعداد تست: ۹۶ تستی

محتویات: میکروپلیت ۹۶ خانه پوشش داده شده، بافر رقیق سازی نمونه، بافر شستشو، بافر استخراج، کالیبراتورها، بلانک و کنترل ها، محلول کنژوگه و محلول سوبسترا.

قیمت: لطفاً استعلام بگیرید

کالپروتکتین

کالپروتکتین یک بیومارکر پروتئینی است که هنگام التهاب روده در مدفوع وجود دارد. آزمایش کالپروتکتین مدفوع به بهبود مراقبت از بیمار و صرفه جویی در هزینه برای NHS کمک می کند. با غربالگری بیماران مبتلا به سندرم روده تحریک پذیر (IBS) از نیاز به روش های آندوسکوپی غیر ضروری در بسیاری از بیماران جلوگیری می کند.

علائم اختلالات عملکردی مانند IBS و بیماری التهابی روده IBD می تواند در تظاهرات بسیار مشابه باشد، اما دو وضعیت پزشکی بسیار متفاوت هستند.

از نظر تاریخی، متخصصان گوارش بالینی مجبور بودند از آندوسکوپی تهاجمی برای تشخیص افتراقی بین این شرایط استفاده کنند. NICE در حال حاضر استفاده از آنالیز کالپروتکتین مدفوع را به عنوان آزمایش خط اول در بیمارانی که با علائم گوارشی نشان دهنده IBS یا IBD مراجعه می کنند، توصیه می کند. تست کالپروتکتین بایوهیت می تواند IBD را رد کند و از نیاز بیماران IBS به انجام آندوسکوپی جلوگیری کند که از استرس بیمار جلوگیری می کند، لیست انتظار را کوتاه می کند و هزینه ها را کاهش می دهد.

بیماری التهابی روده IBD تقریباً ۲ میلیون نفر را در اروپا تحت تأثیر قرار می دهد و شیوع روزافزونی در سراسر جهان نشان می دهد. بیماری کرون (CD) و کولیت اولسراتیو (UC) بیماری‌های مزمن غیرقابل درمان و جدی دستگاه روده هستند. علائم IBD به شدت شبیه علائم بیماری های غیر التهابی مانند سندرم روده تحریک پذیر (IBS)، پولیپ ها یا حتی عفونت های دستگاه گوارش است.

Calprotectin خود را به عنوان یک نشانگر جایگزین بسیار خوب در تشخیص IBD ثابت کرده است و بنابراین به انتخاب مطمئن بیماران برای اقدامات تشخیصی تهاجمی بیشتر کمک می کند.

مدفوع می تواند اطلاعاتی در مورد شرایطی که بر دستگاه گوارش شما تأثیر می گذارد ارائه دهد. این موارد شامل:

بیماری التهابی روده IBD، که شامل کولیت اولسراتیو (UC) و بیماری کرون است.
سندرم روده تحریک پذیر IBS.
عفونت های باکتریایی یا ویروسی.

آزمایش مدفوع کالپروتکتین و به طبع استفاده از (تست کالپروتکتین بایوهیت) غیر تهاجمی است. این آزمایش برای تشخیص و اندازه گیری سطح التهاب در روده مفید است. اطلاعاتی که ارائه می دهد ممکن است نیاز به آزمایش های تهاجمی تر مانند کولونوسکوپی یا سیگموئیدوسکوپی را برطرف کند. آزمایش مدفوع کالپروتکتین برای تشخیص قطعی هیچ بیماری استفاده نمی شود. برای تعیین اینکه آیا مراحل تشخیصی اضافی مورد نیاز است یا خیر مفید است.

ویژگی های کالپروتکتین

مشخصات کالپروتکتین عبارت است از:

هترودایمر پروتئین های متصل شونده به کلسیم (MRP8/14).
متعلق به خانواده پروتئین S-100 است.
از سلول‌های هسته‌دار و مونوسیت‌های پلی‌مورفیک پس از فعال‌سازی (یا مرگ) سلولی در محل‌های التهاب فعال آزاد می‌شود.
می تواند تا ۶۰ درصد از پروتئین سیتوزولی را در ماکروفاژها و گرانولوسیت های نوتروفیل تشکیل دهد.
آپوپتوز را القا می کند.
در پلاسما و مدفوع وجود دارد.
در برابر تخریب آنزیمی مقاومت می کند.

چرا کالپروتکتین را اندازه گیری کنیم؟

اندازه گیری کالپروتکتین مدفوع به عنوان یک شاخص قابل اعتماد از التهاب در نظر گرفته می شود و مطالعات متعدد نشان می دهد که در حالی که غلظت کالپروتکتین مدفوع به طور قابل توجهی در بیماران مبتلا به IBD افزایش می یابد، بیماران مبتلا به IBS سطح کالپروتکتین افزایش یافته ای ندارند. چنین سطوح افزایش یافته به خوبی با ارزیابی آندوسکوپی و بافت شناسی فعالیت بیماری ارتباط دارد.

Calprotectin مدفوعی برای کمک به تمایز بین IBS و IBD استفاده می شود. همچنین برای ارزیابی اثربخشی درمان و پیش بینی خطر شعله ور شدن در بیماران IBD استفاده می شود.

کودکان اغلب سطح کالپروتکتین کمی بالاتر از بزرگسالان دارند.

کالپروتکتین مدفوع نشانگر التهاب در روده است. اغلب برای تشخیص بیماری التهابی روده IBD از سندرم روده تحریک پذیر (IBS) استفاده می شود.

هنگامی که التهاب در روده وجود دارد، گلبول های سفید خون به منطقه آسیب دیده مهاجرت می کنند تا به مبارزه با آن کمک کنند. به عنوان بخشی از پاسخ ایمنی، این خون سفید مواد شیمیایی خاصی آزاد می کند که یکی از آنها کالپروتکتین مدفوع است.

کالپروتکتین مدفوع حدود یک هفته ثابت می ماند، به این معنی که به راحتی می توان آن را در مدفوع تشخیص داد. به طور کلی، فعالیت بیشتر گلبول های سفید = التهاب بیشتر. این بدان معناست که هر چه تعداد کالپروتکتین مدفوع شما بالاتر باشد، التهاب روده شما بیشتر می شود و احتمال ابتلا به IBD بیشتر می شود.

بیماری التهابی روده IBD می تواند بیماری کرون یا کولیت اولسراتیو باشد. IBD جدی‌تر از IBS است، اما بدون آزمایش می‌توان فهمید که کدام یک را دارید، زیرا علائم IBD و علائم IBS اغلب با هم همپوشانی دارند.

علائم ابتلا به IBD و IBS

علائمی که می تواند در هر دو IBD و IBS ایجاد شود عبارتند از:

درد یا گرفتگی شکم
تورم در شکم
اسهال
مخاطی در مدفوع
خستگی

آزمایش کالپروتکتین مدفوع می تواند به شما در درک میزان التهاب در روده کمک کند و به شما نشان دهد که آیا علائم شما احتمالاً به سمت IBS است یا اینکه برای بررسی IBD باید به پزشک مراجعه کنید.

اگر از قبل می‌دانید که مبتلا به IBD (بیماری کرون یا کولیت اولسراتیو) هستید، آزمایش مجدد مرتب تعداد کالپروتکتین مدفوع می‌تواند به شما کمک کند تا ببینید روده شما چقدر بهبود می‌یابد. حتی ممکن است به پیش بینی عود علائم کمک کند.

تنها کاری که کالپروتکتین مدفوع نمی تواند انجام دهد، تمایز بین بیماری کرون و کولیت اولسراتیو است. برای اینکه بدانید کدام نوع بیماری التهابی روده IBD را دارید، باید کولونوسکوپی کنید.

سطح کالپروتکتین مدفوع و NHS

موسسه ملی بهداشت و مراقبت عالی (NICE) کالپروتکتین مدفوع را به عنوان یک ابزار غربالگری برای IBD در سال ۲۰۱۳ تایید کرد، به این معنی که به طور منظم توسط NHS استفاده می شود.

قبل از این، بیماران باید یک کولونوسکوپی تهاجمی را تحمل می کردند تا بررسی کنند که آیا علائم مشابه IBS آنها به IBD شدیدتر کاهش یافته است یا خیر. در حال حاضر، تا زمانی که سرطان قبلاً رد شده است، پزشکان تمایل دارند ابتدا تعداد کالپروتکتین مدفوع را در یک آزمایش مدفوع ساده بررسی کنند – و سپس تصمیم بگیرند که آیا آزمایش‌های بیشتری برای IBD ضروری است یا خیر.

اما همه افرادی که از IBS رنج می برند به طور خودکار برای آزمایش کالپروتکتین مدفوع ارجاع داده نمی شوند. به همین دلیل است که داشتن گزینه ای برای آزمایش کالپروتکتین مدفوع به صورت خصوصی مفید است.

سطح کالپروتکتین مدفوع

از آنجایی که سطوح کالپروتکتین مدفوع میزان التهاب را در روده شما نشان می دهد، سطوح مختلف به این معنی است که باید اقدامات متفاوتی انجام دهید.

واحد اندازه گیری کالپروتکتین مدفوع mcg/g است، به این معنی که آزمایش میکروگرم کالپروتکتین مدفوع را در هر گرم مدفوع تشخیص می دهد. مقادیر اندازه گیری شده ممکن است ناچیز باشند، اما قابل توجه هستند:

سطح زیر ۵۰ به عنوان “عادی” در نظر گرفته می شود و به این معنی است که شما نیازی به انجام هیچ اقدام خاصی ندارید.
سطح بین ۵۰ تا ۱۰۰، همراه با علائم گوارشی، به معنای احتمال IBS است. شما باید اقدامات لازم را برای رفع IBS خود انجام دهید و در صورت تداوم علائم پس از هشت هفته به پزشک عمومی خود مراجعه کنید.
سطح بین ۱۰۰ تا ۲۵۰ قطعی نیست. آزمایش شما ممکن است به طور کاذب بالا باشد.
سطح بالای ۲۵۰ به این معنی است که IBD محتمل است. شما باید فوراً با پزشک خود صحبت کنید تا برای آزمایشات بیشتر معرفی شوید.

به خاطر داشته باشید که همه ما از نظر بیوشیمیایی منحصر به فرد هستیم، بنابراین سطوح کالپروتکتین مدفوع “طبیعی” از فردی به فرد دیگر متفاوت است. در یک فرد، سطوح نیز می تواند روز به روز در نوسان باشد.

درمان بیماری های روده ای

در نمودار زیر، نمودار روند و درمان بیماری روده ای ترسیم شده است.

علل افزایش کالپروتکتین مدفوع

موادی که می توانند سطح کالپروتکتین مدفوع را افزایش دهند عبارتند از:

داروهای ضد التهابی غیر استروئیدی (NSAIDs). شامل آسپرین و ایبوپروفن است.
مهارکننده های پمپ پروتون (PPIs). داروهایی هستند که معمولاً برای سوزش سر دل یا رفلاکس اسید استفاده می شوند.

اگر هر یک از این داروها را مصرف می کنید، ممکن است شمارش کالپروتکتین مدفوع شما دقیق نباشد. اما هرگز نباید دارو را برای انجام تست کالپروتکتین بایوهیت قطع کنید.

شرایطی غیر از بیماری التهابی روده IBD نیز می تواند منجر به افزایش سطح کالپروتکتین مدفوع شود. شامل:

پانکراتیت
سیروز کبدی
عفونت روده

سطح کالپروتکتین مدفوع در سرطان

شواهدی وجود دارد مبنی بر اینکه سرطان کولورکتال (همچنین به عنوان سرطان روده شناخته می شود) همچنین می تواند منجر به افزایش سطح کالپروتکتین مدفوع شود.

اما کالپروتکتین مدفوع به تنهایی نباید برای ارزیابی سرطان کولورکتال استفاده شود. این به این دلیل است که ابزارهای غربالگری بسیار بهتر و بسیار دقیق تری برای سرطان کولورکتال در دسترس است.

برای تست سرطان می توانید از کیت تشخیص سریع سرطان روده و بیماری های گوارشی با آزمایش ایمونوشیمیایی مدفوع (iFOBT یا FIT) استفاده نمایید. برای کسب اطلاعات کیت خون مخفی iFOB کلیک نمایید.

سطح کالپروتکتین مدفوع در کودکان

کودکان و نوجوانان نیز می توانند از نظر کالپروتکتین مدفوع آزمایش شوند، اما این آزمایش ممکن است دقت کمتری داشته باشد. احتمال کالپروتکتین مدفوع مثبت کاذب در بزرگسالان ۴ درصد است در حالی که در کودکان و نوجوانان ۲۴ درصد است.

تفاوت های دیگری نیز وجود دارد. سطح کالپروتکتین مدفوع به طور طبیعی در کودکان بالاتر است. سطح بالاتر کالپروتکتین مدفوع نیز می تواند با بیماری سلیاک و آلرژی غذایی در کودکان مرتبط باشد، در حالی که این ارتباط در بزرگسالان چندان قوی نیست.

نتیجه

کالپروتکتین مدفوع نشانگر التهاب در روده است.

نقش اصلی کالپروتکتین مدفوع تمایز بین موارد سندرم روده تحریک پذیر (IBS) و بیماری التهابی روده جدی تر (IBD) است که شامل بیماری کرون و کولیت اولسراتیو می شود. حتی اگر IBS یا IBD نداشته باشید، باز هم می تواند نشان دهد که آیا التهاب در روده شما وجود دارد یا خیر.

علائم گوارشی همیشه با درجه التهاب مرتبط نیست، بنابراین تنها راه برای اطلاع از سطح کالپروتکتین مدفوع، استفاده از تست کالپروتکتین بایوهیت است.

تغذیه و التهاب روده

همانظور که تا اینجا متوجه شدید علت اصلی التهاب روده و روده بزرگ بیماری التهابی روده (IBD) است. اما چه بخوریم تا از ابتلا به التهاب روده جلوگیری کرده و یا در درمان بیماری به ما کمک کند.

با اطمینان می توان گفت افزودن غذاهای خاص به رژیم غذایی در جلوگیری از ابتلا به التهاب روده تاثیر گذار است. در این نوع

رژیم غذایی در جلوگیری ابتلا به التهاب روده

استفاده از برخی خوراکی ها خطر ابتلا به التهاب روده را افزایش داده و استفاده از برخی خوراکی ها مفید است. در ادامه با این خوراکی ها آشنا خواهید شد:

این خوراکی ها را بیشتر مصرف کنید:

- گوجه فرنگی
- روغن زیتون
- سبزیجات مانند اسفناج، کلم پیچ و …
- اجیل مانند بادام و گردو
- انواع ماهی مانند ماهی قزل الا، ماهی خال مخالی، ماهی تن و ساردین
- میوه هایی مانند توت فرنگی، زغال اخته، گیلاس و پرتقال

از این خوراکی ها پرهیز کنید:

- کربوهیدرات های تصفیه شده مانند نان سفید و شیرینی.
- غذاهای سرخ شده نظیر سیب زمینی سرخ کرده و …
- سودا و مشروبات الکلی.
- گوشت قرمز (برگر، استیک).
- محصولات گوشت فراوری شده (هات داگ، سوسیس).
- مارگارین.

پیشنهادات غذایی هنگام تشدید التهاب روده

- خوردن فیبر (نان سفید، برنج نسبت به غلامت کامل ترجیح دارد).
- خوردن سبزیجات پخته.(هویج، لوبیا سبز، پوره سیب زمینی، پوره کدو حلوایی).
- خوردن میوه (میوه های کمپوت شده و نرم و رسیده ماننده موز، هندوانه، طالبی، سیب پوست کنده)
- خوردن پروتئین کافی (همه نوع گوشت مناسب است و بهتر است بدون چربی، نرم و به صورت کامل پخته شود – تخم مرخ آب پز – آجیل نظیر بادام و بادام زمینی پروتئین مناسبی دارند – سویا)
- نوشیدن آب فراوان (۸ لیوان در روز)

نکات قابل توجه:

دقت نمایید پوست میوه ها و سبزیجات فیبر بیشتری دارد و در صورت امکان آن ها را بدون پوست استفاده نمایید.
از روغن و چربی جامد پرهیز کنید، مناسب ترین آن ها روغن زیتون است.
اسیدهای چرب امگا ۳ که در غذاهایی مانند ماهی قزل آلا وجود دارد می تواند به کاهش التهاب کمک کند.
اگر غذایی رو خوردید و باعث تشدی علائم شدهُ، از آن اجتناب کنید.
زمانی که علائم بیماری بهتر شد، می توانید به آرامی مصرف فیبر در غذای خود را افزایش دهید.

مشخصات کیت کالپروتکتین BIOHIT

BIOHIT Calprotectin ELISA

حیطه کاربرد

BIOHIT Calprotectin ELISA یک روش کمی برای تشخیص کالپروتکتین در نمونه های مدفوع است که می تواند به عنوان کمکی در شناسایی بیماری ارگانیک روده کوچک، روده بزرگ یا معده در بیماران، برای تعیین فعالیت بیماری و نظارت بر پاسخ به درمان در بیماران مبتلا به کولیت اولسراتیو یا بیماری کرون استفاده شود. BIO-HIT Calprotectin ELISA برای نمونه های مدفوع تایید شده است. این آزمایش برای استفاده تشخیصی آزمایشگاهی است.

مشخصات آزمایشگاهی کالپروتکتین

کالپروتکتین یک پروتئین ۳۶ کیلودالتونی کلسیم و روی است که به ویژه از لکوسیت‌ها، گرانولوسیت‌های نوتروفیل پلی‌مورفونوکلئر (PMN) در حین التهاب مخاط روده به مجرای روده آزاد می‌شود. میکروارگانیسم‌های روده لکوسیت‌ها را تحریک می‌کنند تا به مجرای روده مهاجرت کنند و در آنجا محتویات خود از جمله مواد ضد میکروبی مانند کالپروتکتین را آزاد می‌کنند. این پروتئین حدود ۶۰ درصد از کل پروتئین‌های سیتوپلاسم PMNs را تشکیل می‌دهد و می‌توان به طور قابل اعتمادی در نمونه‌های مدفوعی که تا هفت روز در دمای محیط ذخیره می‌شوند آن را تخمین زد.

انواع مختلف بیماری، به عنوان مثال عفونت های باکتریایی، آرتریت روماتوئید و سرطان، منجر به فعال شدن PMN و افزایش سطح کالپروتکتین در پلاسما، مایع مغزی نخاعی، مایع سینوویال، مایع شکافی، ادرار یا سایر مواد انسانی می شود.

غلظت کالپروتکتین در مدفوع با تعداد PMNهایی که به مجرای روده مهاجرت می کنند مرتبط است، و حتی در نمونه های تصادفی مدفوع کوچک (کمتر از یک گرم) می توان به طور قابل اعتمادی تشخیص داد. بیماری‌های ارگانیک روده سیگنال قوی کالپروتکتین می‌دهند، یعنی افزایش مرتباً پنج تا چند هزار برابر بالاتر از مرجع در افراد سالم ۳،۷-۹ است، که نشان‌دهنده التهاب روده است.

بیماری التهابی روده IBD، یعنی کولیت اولسراتیو و بیماری کرون، ممکن است از اوایل کودکی تا اواخر بزرگسالی ظاهر شوند و تشخیص اغلب به دلیل علائم مبهم یا عدم تمایل به انجام آندوسکوپی و بیوپسی به تاخیر می افتد. BIOHIT Calprotectin ELISA می تواند به تشخیص زودهنگام IBD کمک کند زیرا این آزمایش معمولاً در IBD فعال مثبت است.

اختلالات عملکردی مانند سندرم روده تحریک پذیر (IBS) باعث افزایش غلظت کالپروتکتین مدفوعی نمی شود، اما اختلالات ارگانیک شکمی مانند IBD باعث افزایش غلظت کالپروتکتین در مدفوع می شود. بیماران مبتلا به اختلالات شکمی ارگانیک و عملکردی ممکن است علائم مشابهی داشته باشند و معاینه بالینی به تنهایی ممکن است برای دادن یک تشخیص خاص کافی نباشد.

آزمایش کالپروتکتین مدفوع یک روش ساده، غیر تهاجمی، ارزان و عینی است که می تواند به انتخاب بیماران برای معاینه اضافی مانند آندوسکوپی کمک کند. علائم شکمی هم در کودکان و هم در بزرگسالان بسیار رایج است و یک نتیجه منفی که توسط BIOHIT Calprotectin ELISA اندازه‌گیری می‌شود، با احتمال بالا می‌تواند اختلالات التهابی روده را رد کند.

ترمیم مخاط هدف بهینه برای درمان IBD است و تست کالپروتکتین بایوهیت نشان می دهد که چه زمانی به این هدف رسیده است. بسیاری از بیماران IBD در بهبودی بالینی با سطوح طبیعی پروتئین واکنشی C (CRP) هنوز التهاب مداوم دارند که با افزایش کالپروتکتین مدفوع منعکس می شود. چنین بیمارانی در عرض چند ماه خطر عود را افزایش می دهند. اگر بتوان به بهبود مخاط دست یافت، خطر عود و نیاز به جراحی بزرگ شکم کاهش می یابد. عادی سازی سطوح کالپروتکتین به این معنی است که بهبودی مخاطی حاصل شده است.

فناوری Calprotectin ELISA همچنین برای تجزیه و تحلیل نمونه‌های سرم و پلاسما استفاده شده است و سطوح بالای کالپروتکتین در بیماران مبتلا به عفونت‌های باکتریایی، سپسیس و بیماری‌های التهابی مانند آرتریت روماتوئید (RA) و لوپوس اریتماتوز سیستمیک مشاهده شده است. مقالات علمی نشان می‌دهند که کالپروتکتین در سرم/پلاسما نشانگر برتر فعالیت بیماری در RA و SLE است و می‌تواند عود را پیش‌بینی کند. همچنین نشانگر خوبی برای حوادث حاد عروق کرونر است که منجر به انفارکتوس میوکارد می شود.

اساس تست کالپروتکتین بایوهیت به روش الایزا

BIOHIT Calprotectin ELISA بر اساس تهیه عصاره مدفوع با استفاده از بافر استخراج مدفوع است. سطح کالپروتکتین با آزمایش عصاره در یک روش ایمونواسی مرتبط با آنزیم (ELISA) مخصوص کالپروتکتین تعیین می شود.

در ELISA، نمونه ها و کالیبراتورها در چاهک های میکروتیتر جداگانه پوشیده شده با آنتی بادی های مونوکلونال که به Calprotectin متصل می شوند، انکوبه می شوند. پس از انکوباسیون و شستشوی چاهک‌ها، کالپروتکتین متصل شده اجازه می‌یابد تا با آنتی‌بادی‌های اختصاصی کالپروتکتین دارای برچسب آنزیمی و خالص‌شده با ایمونوافینیتی واکنش دهد.

پس از این واکنش، مقدار آنزیم متصل شده در چاهک های میکروتیتر متناسب با مقدار کالپروتکتین در نمونه یا کالیبراتور است که با انکوباسیون با یک بستر برای آنزیم که محصول رنگی می دهد، تعیین می شود. شدت رنگ با جذب با استفاده از پلیت خوان الایزا تعیین می شود و با غلظت کالپروتکتین در کالیبراتورها و نمونه ها متناسب است. سنجش با استفاده از Calprotectin خالص شده از عصاره لکوسیت کالیبره شده است.

معرف های کیت کالپروتکتین BIOHIT

1. Coated Microtiterplate
2. Sample Dilution Buffer (5x conc.)
3. Washing Buffer (20x conc.)
4. Fecal Extraction Buffer (2.5x conc.)

کنترل و استانداردهای کیت

1. Controls “Low” and “High”: ۲ vials
2. Conjugate Solution
3. Substrate Solution (pNPP)

Calprotectin Calibrators

کالیبراتورهای کیت کالپروتکتین BIOHIT در جدول زیر آمده است.

Blank: Blue cap	۰	ng/mL
Calibrator 1: Green cap	۷.۸	ng/mL
Calibrator 2: Yellow cap	۳۱.۳	ng/mL
Calibrator 3: Red cap	۶۲.۵	ng/mL
Calibrator 4: White cap	۱۲۵	ng/mL
Calibrator 5: Black cap	۵۰۰	ng/mL

پایداری و نگهداری

هنگامی که در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتیگراد در حالت باز نشده نگهداری می شود، واکنش گرهای کیت کالپروتکتین BIOHIT تا تاریخ انقضای ذکر شده روی برچسب پایدار هستند.

پلیت های باز شده، معرف ها و بافرهای غلیظ تا سه ماه در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی گراد نگهداری می شوند.

هنگامی که در ظروف تمیز آماده می شود، محلول ها(۱x) از بافر شستشو، بافر رقیق سازی نمونه و بافر استخراج مدفوع را می توان تا یک ماه در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی گراد نگهداری کرد.

از قرار گرفتن در معرض دمای بالا و نور مستقیم خورشید خودداری کنید.

آماده سازی معرف

تمام معرف ها، نمونه ها و کنترل ها باید قبل از شروع آزمایش به دمای اتاق (۱۸ تا ۲۵ درجه سانتیگراد) برسند.

نوارهای پلیت میکروتیتر پوشش داده شده

نوارهای پلیت آماده برای استفاده با آنتی بادی های مونوکلونال موش خالص شده با میل ترکیبی مخصوص کالپروتکتین پوشانده شده اند. نوارهای استفاده نشده باید از قاب خارج شده و بلافاصله در کیسه فویل آلومینیومی همراه با ماده خشک کن عرضه شده دوباره بسته بندی شوند. در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتی گراد نگهداری شود.

بافر رقیق سازی نمونه

بافر رقیق سازی نمونه غلیظ ۵x را با افزودن ۱ قسمت (۲۰ میلی لیتر) به ۴ قسمت (۸۰ میلی لیتر) آب مقطر/دیونیزه شده در ظرفی تمیز تا حجم نهایی ۱۰۰ میلی لیتر رقیق کنید. خوب مخلوط کنید. بافر رقیق سازی نمونه رقیق شده را در ظرف دربسته در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتیگراد نگهداری کنید.

توجه: در صورت استفاده از خودکار Dynex DS2 یا DSX ELISA، بافر رقت نمونه باید قبل از اجرای آزمایش به یک لوله معرف داینکس ۲۵ میلی لیتری منتقل شود.

بافر شستشو

بافر شستشوی غلیظ ۲۰x را با افزودن ۱ قسمت (۵۰ میلی لیتر) به ۱۹ قسمت (۹۵۰ میلی لیتر) آب مقطر/دیونیزه شده در ظرفی تمیز تا حجم نهایی ۱۰۰۰ میلی لیتر رقیق کنید. خوب مخلوط کنید. بافر شستشوی رقیق شده را در ظرف دربسته در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتیگراد نگهداری کنید.

بافر استخراج مدفوع

بافر ۲.۵x غلیظ استخراج مدفوع را با افزودن ۱ قسمت (۹۰ میلی لیتر) به ۱.۵ قسمت (۱۳۵ میلی لیتر) آب مقطر/دیونیزه شده در ظرفی تمیز تا حجم نهایی ۲۲۵ میلی لیتر رقیق کنید. خوب مخلوط کنید. بافر رقیق شده را در ظرف دربسته در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتیگراد نگهداری کنید.

کالیبراتورها، بلانک و کنترل ها

ویال‌هایی که با بلنک، کالیبراتور، و همچنین کنترل‌ها برچسب‌گذاری شده‌اند، حاوی ۱.۰ میلی لیتر از هر یک از یک محلول آماده برای استفاده. غلظت کالپروتکتین روی برچسب هر ویال درج شده است. ویال ها مستقیماً در دستگاه های خودکار Dynex DS2 و DSX ELISA قرار می گیرند.

محلول کنژوگه

این لوله حاوی ۱۳ میلی‌لیتر آنتی‌بادی خرگوش با نشاندار آلکالین فسفاتاز (AP) و خالص‌شده با ایمنی میل ضد کالپروتکتین در بافری با تثبیت‌کننده‌ها، نگهدارنده‌ها و رنگ قرمز بی‌اثر است. محلول آماده استفاده است. لوله به طور مستقیم در دستگاه های Dynex DS2 و DSX ELISA خودکار قرار می گیرد.

محلول سوبسترا

بطری حاوی ۱۳ میلی لیتر محلول p-nitrophenylphosphate (pNPP) است. محلول آماده استفاده است و باید در بطری اصلی و مات نگهداری شود.

توجه: در صورت استفاده از خودکار Dynex DS2 یا DSX ELISA، محلول زیر لایه آنزیمی باید قبل از اجرای آزمایش به یک لوله معرف داینکس ۲۵ میلی لیتری منتقل شود.

جمع آوری و آماده سازی نمونه

کیت کالپروتکتین BIOHIT عمدتاً برای نمونه های مدفوع طراحی شده است، اما می تواند برای نمونه های پلاسما/سرم نیز استفاده شود.

نمونه مدفوع

از آنجایی که کالپروتکتین در مدفوع بسیار پایدار است، بیماران می توانند نمونه های کوچک مدفوع را در خانه جمع آوری کنند. ۱ تا ۵ گرم (تقریباً یک قاشق چایخوری) جمع آوری کنید، آن را در ظرف تمیز مناسبی قرار دهید و در اسرع وقت در عرض چهار روز به آزمایشگاه تحویل دهید. هنگامی که در یک ظرف مورد تایید برای حمل و نقل قرار می گیرد، می توان آن را به صورت معمولی ارسال کرد، یعنی نیازی به یخچال نیست. از قرار گرفتن در معرض دمای بالاتر از ۳۰ درجه سانتیگراد باید اجتناب شود.

نمونه‌ها را می‌توان تا زمان تحویل یا ارسال در دمای ۲۰- درجه سانتی‌گراد یا پایین‌تر در حالت منجمد نگهداری کرد. نمونه های منجمد قبل از استخراج و آزمایش باید ذوب شده و با دمای اتاق متعادل شوند. توجه داشته باشید که انجماد نمونه های مدفوع در برخی موارد می تواند منجر به افزایش سطح کالپروتکتین شود که به احتمال زیاد به دلیل آزاد شدن از گرانولوسیت ها است.

توجه: قبل از شروع استخراج، نمونه مدفوع باید به خوبی با استفاده از کاردک، قبل از خارج کردن مقدار کمی برای استخراج، همگن شود.

نمونه های پلاسما و سرم

سطوح واقعی کالپروتکتین در سرم یا پلاسما مستلزم آن است که پروتئین از گرانولوسیت های نوتروفیل در خون در شرایط آزمایشگاهی آزاد نشود. برای پلاسما، EDTA ضد انعقاد ترجیحی است.

⇓محتویات کیت الایزا جهت تست کالپروتکتین بایوهیت در تصاویر زیر آمده است. برای مشاهده بزرگتر تصاویر بر روی آن ها کلیک کنید.⇓

روش آزمون

روش زیر برای تست کالپروتکتین بایوهیت به روش دستی است. پروتکل های تایید شده برای Dynex DS2 و DSX ELISA خودکار در صورت درخواست در دسترس هستند. لطفاً توجه داشته باشید که کالیبراتور، ویال‌های خالی و کنترل مثبت، و همچنین لوله کنژوگه، مستقیماً در دستگاه‌های خودکار DS2 یا DSX ELISA قرار می‌گیرند. سایر ابزارهای ELISA خودکار نیز می توانند مورد استفاده قرار گیرند، اما باید توسط مشتری تأیید شوند.

آماده سازی: لطفاً قبل از انجام تست کالپروتکتین بایوهیت، پروتکل آزمایش را به دقت بخوانید. قابلیت اطمینان نتیجه بستگی به رعایت دقیق پروتکل تست کالپروتکتین بایوهیت همانطور که توضیح داده شد دارد. قبل از شروع آزمایش، یک طرح پلیت برای همه قسمت‌های خالی، کالیبراتورها، کنترل‌ها و نمونه‌ها باید به دقت تنظیم شود، برای مثال، از ورق ارائه شده در کیت کالپروتکتین BIOHIT استفاده شود. تعداد مورد نیاز نوار میکروتیتر را انتخاب کنید. نوارهای استفاده نشده باید دوباره در کیسه آلومینیومی بسته بندی و نگهداری شوند.
رقت ۱:۱۰۰ عصاره مدفوع توصیه می شود. این رقت نتایج نمونه را بین mg/kg 25 (LoQ) تا ۲۵۰۰ mg/kg در مدفوع نشان می‌دهد. عصاره های با مقادیر کالپروتکتین بالاتر را می توان بیشتر رقیق کرد (> 1:100) و در صورت نیاز مجدداً آزمایش کرد. عصاره های با مقادیر کم کالپروتکتین را می توان کمتر رقیق کرد (۱:۵۰). ضریب رقت تنظیم شده باید هنگام تبدیل از ng/mL به mg/kg در نظر گرفته شود
تمام مراحل سنجش را به ترتیب داده شده و بدون تاخیر بین مراحل انجام دهید.
یک نوک پیپت تمیز و یکبار مصرف باید برای توزیع هر کالیبراتور، کنترل و نمونه استفاده شود.
برای دستیابی به قابل اطمینان ترین نتایج، نمونه های خالی، کالیبراتورها، کنترل ها و نمونه های بیمار همیشه باید به صورت تکراری اجرا شوند.
تمام نمونه ها و واکنشگرهای کیت کالپروتکتین BIOHIT باید قبل از شروع آزمایش در دمای اتاق (۱۸ تا ۲۵ درجه سانتیگراد) متعادل شوند.

روش الایزا

نمونه های عصاره مدفوع را به نسبت ۱:۱۰۰ رقیق کنید (مثلاً ۱۰ میکرولیتر نمونه + ۹۹۰ میکرولیتر نمونه بافر رقیق سازی) و خوب مخلوط کنید.
۱۰۰ میکرولیتر از هر نمونه خالی، کالیبراتور، شاهد و نمونه رقیق شده اضافه کنید.
روی پلیت را با فویل بپوشانید و در دمای اتاق به مدت ۵±۴۰ دقیقه*) روی یک تکان دهنده پلیت افقی (تقریباً ۵۰۰ تا ۷۰۰ دور در دقیقه) انکوبه کنید.
در پایان زمان انکوباسیون، مایع را خارج کرده و با افزودن ۳۰۰ میکرولیتر بافر شستشو به هر چاهک، چاه ها را بشویید. تا حد امکان مایع را بردارید و این کار را تکرار کنید تا در مجموع سه بار شستشو انجام شود. اگر از واشر پلیت استفاده می شود، بررسی کنید که تمام پروب های مکش و پرکننده باز شده باشند تا از شستشوی کارآمد همه چاه ها اطمینان حاصل شود. پس از شستشوی نهایی، پلیت را برعکس کنید و دهانه چاه را کاملاً روی دستمال جاذب بزنید تا باقیمانده بافر شستشو حذف شود.
محتویات ویال Conjugate را قبل از استفاده به آرامی مخلوط کنید (تکان ندهید). ۱۰۰ میکرولیتر کونژوگه را به هر چاهک ترجیحاً با استفاده از پیپت تکراری یا چند کاناله اضافه کنید.
پلیت را با فویل آب بند بپوشانید و در دمای اتاق به مدت ۵±۴۰ دقیقه*) روی یک تکان دهنده پلیت افقی (تقریباً ۵۰۰ تا ۷۰۰ دور در دقیقه) انکوبه کنید.
مراحل شستشو را همانطور که در بالا توضیح داده شد، سه بار با ۳۰۰ میکرولیتر محلول شستشو در هر چاهک تکرار کنید.
۱۰۰ میکرولیتر محلول بستر را به هر چاهک، ترجیحاً با استفاده از پیپت تکراری یا چند کاناله اضافه کنید.
پلیت را در دمای اتاق (بدون تکان دادن) به مدت ۲۰ تا ۳۰ دقیقه دور از نور انکوبه کنید.
اختیاری: در صورت ثابت بودن ۱۰۰ میکرولیتر محلول توقف سدیم ۱ مولار به هر چاهک اضافه کنید.
دوره کمون مورد نیاز است.
مقادیر چگالی نوری (OD) را در ۴۰۵ نانومتر با استفاده از یک ELISA reader بخوانید. اگر پلیت خوان این گزینه را دارد، قبل از خواندن، پلیت را به طور مختصر (۲ تا ۳ ثانیه) تکان دهید.
*) اختیاری: کاهش زمان انکوباسیون (روش دستی). زمان انکوباسیون می تواند بدون تغییر نتایج به ۳۰±۵ دقیقه کاهش یابد. کاهش در مقادیر OD ممکن است مشاهده شود، و حداکثر مقدار OD برای استاندارد برتر (۵۰۰ نانوگرم در میلی لیتر) ممکن است کمتر از ۱.۸۰۰ توصیه شده باشد، اما این روی نتایج تأثیری ندارد.

محاسبه نتایج

محاسبه غلظت کالپروتکتین در نمونه مدفوع بیمار:

میانگین مقادیر OD همه چاه های تکراری (بلنک، کالیبراتورها و نمونه ها) را محاسبه کنید.
مقدار بلانک و هر غلظت کالیبراتور (ng/mL) را روی محور x در برابر میانگین مقدار OD آن در محور y رسم کنید تا منحنی کالیبراسیون به دست آید. یک تابع برازش منحنی ۴ پارامتری توصیه می شود. اگر یک محور x لگاریتمی مورد نیاز است، باید مقدار ۰.۰۰۱ ng/mL برای استاندارد A (0ng/mL) استفاده شود.
از منحنی کالیبراسیون در نمونه های رقیق شده (ng/ml) بر اساس مقادیر OD آنها برای تعیین غلظت کالپروتکتین استفاده کنید.
غلظت Calprotectin (ng/mL) در عصاره مدفوع رقیق شده را در ۵ ضرب کنید تا در نمونه مدفوع اصلی به mg/kg کالپروتکتین تبدیل شود.

تفسیر نتایج

مقادیر کالپروتکتین در نمونه های مدفوع

مقدار نرمال ۵-۵۰ میلی گرم بر کیلوگرم

مقدار مثبت > 50 mg/kg

مقدار متوسط در بیماران مبتلا به سرطان کولورکتال علامت دار ۳۵۰ میلی گرم بر کیلوگرم است

روده التهابی فعال و علامت دار

بیماری ۲۰۰-۴۰۰۰۰ میلی گرم بر کیلوگرم

محدودیت های تست کالپروتکتین بایوهیت

تشخیص نباید بر اساس یک نتیجه آزمایش مشخص شود.

ویژگی های عملکردی کیت کالپروتکتین BIOHIT

حد کمیت

۵ نانوگرم در میلی لیتر؛ با عصاره مدفوع، پلاسما و کالپروتکتین خالص آزمایش شده است. نمونه ها پنج بار در طول پنج روز آنالیز شدند. میانگین CV برای نمونه های مختلف و تعیین در این سطح ۱۲ درصد بود.

حد تشخیص

< 5 نانوگرم در میلی لیتر؛ به عنوان میانگین محاسبه شد (بافر رقت نمونه؛ n= 32) + 5x SD.

تداخل

هیچ تداخلی در ELISA از داروسازی رایج مشاهده نشده است.

تیکال ها: پردنیزولون، ایمورل، سالازوپیرین و سیپروفلوکساسین.

کیت کلپروتکتین با برند های دیگر نیز توسط شرکت توسعه سلامت توان آفرین توزیع می گردد. جهت آشنایی با کیت کلپروتکتین پیشتازطب کلیک کنید.

جهت تشخیص بیماری التهابی روده IBD و تعین کمی سطح بایوهیت استفاده از کیت کالپروتکتین BIOHIT بهترین گزینه است.

تستا عرضه کننده انواع کیت های آزمایشگاهی و تست کالپروتکتین بایوهیت.

منابع

کیت کالپروتکتین BIOHIT | تست کالپروتکتین بایوهیت

⊗ برای قیمت استعلام بگیرید (۰۹۱۲۴۵۴۵۹۶۵)

تستا عرضه کننده کیت کالپروتکتین BIOHIT (بایوهیت).