رنگ رتیکولوسیت | Retic Stain | رنگ Retic-S

اساس رنگ آماده مصرف رتیکولوسیت

اساس شمارش رتیکولوسیت اینست که ریبوزوم ها با محلول ایزوتونیک رنگهای قلیائی خاص مثل آزور B، کرسیل بلو بریلیانت یا نیو متیلن بلوو (NMB)  واکنش می دهند و رسوبی بصورت گرانول یا فیلامانت  آبی یا بنفش تشکیل می دهند. این واکنش تنها با رنگهای حیاتی و در نمونه های فیکس نشده رخ می دهد.

رنگ های سوپراویتال رنگ هایی هستند که مواد زنده را رنگدار می کنند. از این رو، برای تشخیص RNA ریبوزومی رتیکولوسیت ها، باید آنها را تثبیت کرد. از آنجایی که سلول ها هنگام رنگ آمیزی زنده هستند، به این نوع رنگ آمیزی، رنگ آمیزی حیاتی می گویند. خون با رنگ مخلوط شده و انکوبه می شود. RNA موجود در سلول به صورت شبکه یا شبکه آبی تیره رسوب می کند. اسمیر خون ساخته شده و زیر میکروسکوپ بررسی می شود. از آنجایی که شمارش مستقیم امکان پذیر نیست، یک شمارش نسبی در برابر تعداد RBc ها گرفته می شود و به عنوان درصد RBC بیان می شود.

 روش رنگ آمیزی

رنگ رتیکولوسیت آماده مصرف بوده و حاوی رنگ قلیایی مانند نیو متیلن بلو (NMB) و یا آزور B است که با ریبوزوم واکنش نشان می دهد و به رنگ آبی تا بنفش قابل مشاهده می باشد.

1. ۲ قطره خون حاوی ماده ضد انعقاد (EDTA) و ۲ قطره رنگ رتیکولوسیت را در یک لوله آزمایش کوچک بریزید و خوب مخلوط کنید.
2. لوله ها را با یک پنبه بپوشانید و به مدت ۱۵-۲۰ دقیقه در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد انکوبه کنید.
3. قبل از تهیه گسترش لوله را به آرامی تکان دهید تا گلبول های قرمز مجددا به حالت سوسپانسیون درآیند.
4. یک اسمیر نازک از نمونه خون رنگ شده تهیه کنید و در هوا خشک کنید.
5. گسترش ها پس از خشک شدن، بدون فیکساسیون و انجام رنگ آمیزی دیگری، توسط میکروسکوپ قابل بررسی می باشند.

حجم دقیق خونی که به محلول رنگ اریتروسیت اضافه می شود به تعداد گلبول‌های قرمزبستگی دارد. در موارد آنمی، مقدار خون بیشتر و در پلی سیتمی، مقدار خون کمتری، نسبت به حالت طبیعی، باید با رنگ مخلوط شود .
در یک گسترش مناسب ، ریبوزوم رتیکولوسیت ها به رنگ آبی درمی آید و سلولهای بالغ در سطح لام به شکل سایه های کمرنگ آبی مایل به سبز دیده می شوند.

در تصویر زیر، شبکه ها و رشته های آبی تیره (رتیکولوم) به خوبی دیده می شوند.