Name: کیت الایزا کالپروتکتین پیشتاز طب | آزمایش کلپروتکتین Calprotectin
Brand: pishtazteb
SKU: CALPRO-130
Price: 25200000 IRR
Availability: InStock

Description

آزمایش کلپروتکتین Calprotectin

معرفی کیت الایزا کالپروتکتین پیشتاز طب

Calprotectin Test

خرید کیت آزمایش کلپروتکتین Calprotectin

کاربرد: تشخیص التهاب رودها و IBD.

تستا عرضه کننده کیت الایزا کالپروتکتین پیشتاز طب

برند: پیشتاز طب

تعداد در بسته: ۹۶ تستی

محتویات: ۲ پلیت ۹۶ test آماده – دو ویال بافر استخراج – دو ویال کنترل – ۶ ویال مجموعه ای از استانداردها – و یک ویال از هر کدام از محلول های آنزیم کونژوگه، رقیق کننده، رنگزا، شستشو و متوقف کننده

قیمت : ۴۲۰۰۰۰۰ تومان

شرکت توسعه سلامت توان آفرین (تستا)، کیت الایزا کالپروتکتین پیشتاز طب را معرفی و عرضه می نماید.

برای خرید کیت مخصوص آزمایش کلپروتکتین با برند پیشتاز طب در تستا شاپ ثبت سفارش نمایید.

کلپروتکتین Calprotectin چیست؟

کلپروتکتین پروتئینی است که توسط گلبول های سفید خون در پاسخ به التهاب ساخته می گردد. هنگامی که التهاب در روده ها وجود دارد، گلبول های سفید خون به نام نوتروفیل ها به آن ناحیه از بدن می روند و کلپروتکتین را در تلاش برای مبارزه با بیماری یا عفونت آزاد می کنند.

التهاب در دستگاه گوارش می تواند نشانه ای از بیماری التهابی روده IBD باشد. IBD یک اصطلاح برای شرایط مزمنی است که باعث التهاب طولانی مدت در دستگاه گوارش می شود. نمونه هایی از IBD عبارتند از:

کولیت زخمی
بیماری کرون

آزمایش کلپروتکتین (تست مدفوع) می تواند به پزشک در تشخیص IBD کمک کند. همچنین می توان از آن برای نظارت بر شدت IBD پس از تشخیص استفاده کرد. آزمایش کلپروتکتین به تمایز بین IBD و IBS کمک میکند. IBS یک بیماری روده غیرالتهابی است که اغلب با علائم مشابهی همراه است. سطوح بالای کلپروتکتین در مدفوع ممکن است نشان دهنده شرایط دیگری مانند:

عفونت باکتریایی
عفونت انگلی
سرطان روده بزرگ

Ulcerative colitis

این وضعیت شامل التهاب و زخم (زخم) در امتداد پوشش روده بزرگ (کولون) و راست روده است.

Crohn’s disease

این نوع IBD با التهاب پوشش داخلی دستگاه گوارش مشخص می شود که اغلب می تواند لایه های عمیق تر دستگاه گوارش را درگیر کند. بیماری کرون بیشتر روده کوچک را درگیر می کند. با این حال، می تواند روده بزرگ و به طور غیر معمول، دستگاه گوارش فوقانی را نیز تحت تاثیر قرار دهد. کولیت اولسراتیو و بیماری کرون معمولاً با اسهال، خونریزی مقعدی، درد شکم، خستگی و کاهش وزن قابل تشخیص است. برای برخی افراد، IBD فقط یک بیماری خفیف است و برای برخی این یک وضعیت ناتوان کننده است که می تواند منجر به عوارض تهدید کننده زندگی شود.

علائم IBD

علائم بیماری التهابی روده بسته به شدت التهاب و محل وقوع آن متفاوت است. علائم ممکن است از خفیف تا شدید متغیر باشد. احتمالاً دوره‌هایی از بیماری فعال و به دنبال آن دوره‌های بهبودی خواهید داشت.

علائم و نشانه هایی که هم در بیماری کرون و هم در کولیت اولسراتیو مشترک هستند عبارتند از:

اسهال
خستگی
درد و گرفتگی شکم
خون در مدفوع شما
کاهش اشتها
کاهش وزن ناخواسته
علل

علت دقیق بیماری التهابی روده ناشناخته باقی مانده است. قبلاً رژیم غذایی و استرس مشکوک بود، اما اکنون پزشکان می‌دانند که این عوامل ممکن است تشدید شوند، اما علت IBD نیستند.

یکی از دلایل احتمالی اختلال در عملکرد سیستم ایمنی است. هنگامی که سیستم ایمنی بدن شما سعی می کند با یک ویروس یا باکتری مهاجم مبارزه کند، یک پاسخ ایمنی غیر معمول باعث می گردد که سیستم ایمنی به سلول های دستگاه گوارش نیز حمله کند. چندین جهش ژنی با IBD مرتبط است. به نظر می رسد وراثت نیز در این که IBD در افرادی که اعضای خانواده مبتلا به این بیماری را دارند شایع تر است. با این حال، اکثر افراد مبتلا به IBD این سابقه خانوادگی را ندارند.

عوامل خطر

سن. اکثر افرادی که به IBD مبتلا می شوند قبل از ۳۰ سالگی تشخیص داده می شوند. اما برخی افراد تا ۵۰ یا ۶۰ سالگی به این بیماری مبتلا نمی شوند.

نژاد یا قومیت. اگرچه IBD در افراد سفیدپوست شایع تر است، اما در هر نژادی ممکن است رخ دهد. موارد در سایر نژادها و قومیت ها نیز رو به افزایش است.

سابقه خانوادگی. اگر یکی از بستگان نزدیک – مانند والدین، خواهر و برادر یا فرزند – مبتلا به این بیماری باشد، در معرض خطر بیشتری قرار دارید.

سیگار کشیدن. سیگار کشیدن مهم ترین ریسک فاکتور قابل کنترل برای ابتلا به بیماری کرون است.

سیگار ممکن است به پیشگیری از کولیت اولسراتیو کمک کند.

با این حال، مضرات آن برای سلامتی کلی بیشتر از هر مزیتی است و ترک سیگار می تواند سلامت عمومی دستگاه گوارش شما را بهبود بخشد و همچنین فواید دیگری نیز برای سلامتی به همراه داشته باشد.

داروهای ضد التهابی غیر استروئیدی. این داروها عبارتند از ایبوپروفن (Advil، Motrin IB) ، ناپروکسن سدیم (Aleve، دیکلوفناک سدیم). این داروها ممکن است خطر ابتلا به IBD را افزایش دهند یا بیماری را در افرادی که مبتلا به IBD هستند بدتر کنند.

سطح کلپروتکتین مدفوع در افراد مبتلا به التهاب روده به طور غیر طبیعی افزایش مییابد، بنابراین برای تشخیص اسهال التهابی و غیر التهابی مفید است. به طور خاص، آزمایش کلپروتکتین ممکن است در تمایز بین بیماری التهابی روده و سندرم روده تحریک‌پذیر مفید باشد – سطح کلپروتکتین در بیماری اول بالاتر و در دومی طبیعی است.

کلپروتکتین مبتنی بر خون (در سرم و پلاسما) در تشخیص بیماری های التهابی متعدد، از جمله بیماری های خودایمنی، مانند آرتریت، و عفونت های شدید از جمله سپسیس استفاده می گردد.

کلپروتکتین تا ۶۰ درصد محتوای پروتئین محلول در سیتوزول گرانولوسیت های نوتروفیل را تشکیل می دهد و می توان آن را در غلظت کمتری در مونوسیت ها، ماکروفاژها و سلول های اپیتلیال سنگفرشی یافت.

کلپروتکتین در طول مرگ سلولی نوتروفیل همراه با سایر پروتئین های ضد میکروبی وارد مایع چرک و آبسه می گردد.

سلول های پستانداران در طول پاسخ التهابی کلپروتکتین ترشح می کنند. در بیماری های ترومبو التهابی استریل حاد و مزمن، پلاکت های فعال شده در گردش و تجمعات پلاکت-لکوسیت افزایش می یابد. کلپروتکتین پلاسما در افراد مبتلا به سندرم متابولیک، بیماری که با التهاب مزمن مشخص می شود، افزایش می یابد. کلپروتکتین در هنگام التهاب لثه و در هنگام عفونت کاندیدیازیس دهان در دهان ترشح میشود. افرادی که دارای جهش در ژن کلپروتکتین هستند به نظر میرسد مستعد ابتلا به عفونت های جدی لثه هستند.

کلپروتکتین بیشتر از نوتروفیل ها و مونوسیت ها که سلول های سیستم ایمنی هستند تولید می شود.

این سلول ها تکثیر می شوند و در مناطق التهابی تجمع می یابند. بنابراین، سطح کلپروتکتین نشانگر فعالیت نوتروفیل است. سطوح کلپروتکتین کمتر از ۵۰ میکروگرم در گرم نشان می دهد که هیچ فرآیند التهابی در روده بزرگ رخ نمی دهد.

سطوح بالای ۱۲۰ میکروگرم بر گرم تقریباً به طور قطع نشان دهنده نوعی فرآیند التهابی در روده بزرگ است.

مقادیر بین ۵۰ تا ۱۲۰ میکروگرم در گرم در نظر گرفته میشود، به این معنی که ممکن است یک فرآیند التهابی خفیف وجود داشته باشد.

کلپروتکتین از طریق ریزش لکوسیت، ترشح فعال، اختلال سلولی و مرگ سلولی در لومن روده در دسترس میشود که منجر به افزایش سطح کلپروتکتین مدفوع میشود که می تواند در مدفوع تشخیص داده شود.

بنابراین افزایش سطح کلپروتکتین مدفوع نشان دهنده مهاجرت نوتروفیل ها به مخاط روده است که در طول التهاب روده رخ میدهد. از آنجایی که افراد مبتلا به بیماری های التهابی فعال روده (IBD) مانند کولیت اولسراتیو یا بیماری کرون، تا ۱۰ برابر افزایش سطح کلپروتکتین مدفوع دارند، آزمایش کلپروتکتین مدفوع می تواند به عنوان یک آزمایش بیوشیمیایی برای این بیماری ها باشد.

اگرچه آزمایش کلپروتکتین مدفوعی یک آزمایش نسبتاً جدید است، اما به طور مرتب به عنوان یک شاخص برای IBD در طول درمان و به عنوان یک نشانگر تشخیصی استفاده میشود. آزمایش کلپروتکتین مدفوع همچنین می تواند در تشخیص بیماران مبتلا به سندرم روده تحریک پذیر از مبتلایان به IBD عمل کند.

کلپروتکتین به عنوان یک نشانگر مفید است، زیرا در برابر تجزیه آنزیمی مقاوم است و به راحتی در مدفوع اندازه گیری میشود.

اگرچه کلپروتکتین مدفوع به طور قابل توجهی با فعالیت بیماری در افراد مبتلا به IBD تایید شده مرتبط است، افزایش کلپروتکتین مدفوع میتواند در برخی شرایط نشانگر مثبت کاذب IBD باشد. نکته مهم این است که مصرف مهارکننده پمپ پروتون با افزایش قابل توجهی مقادیر کلپروتکتین همراه است.

علاوه بر این، کلپروتکتین مدفوع مثبت در تشخیص کولیت اولسراتیو از بیماری کرون کمک نمیکند. کلپروتکتین مدفوع همچنین میتواند نشان دهنده سایر بیماری های گوارشی مانند سرطان کولورکتال، گاستروانتریت و عدم تحمل غذایی باشد. سطوح کلپروتکتین بسته به سن، بیماری همراه متفاوت است و ممکن است در هر روز در افراد متفاوت باشد.

کلپروتکتین مدفوع می تواند به عنوان یک غربالگری مقدماتی در بیماران غیرفعال مشکوک به IBD یا به عنوان وسیله ای برای بهبود مخاط استفاده شود.

خوانش های مرزی ممکن است در افرادی که دوزهای روزانه NSAID، مهارکننده‌های پمپ پروتون یا آسپرین مصرف می‌کنند، رخ دهد. معمولاً برای افرادی که سطح کلپروتکتین مرزی یا غیرطبیعی دارند، انجام کارهای بیشتری مورد نیاز است.

مشخصات کیت الیزای کلپروتکتین پیشتاز طب

کلپروتکتین یک پروتئین اتصال دهنده به کلسیم و روی است که از خانواده پروتئین های S100 و یک دایمر ۲۴ کیلو دالتون است که توسط مونومرهای S100A8 و S100A9 تشکیل شده است. کلپروتکتین تقریباً ۶۰ درصد از پروتئین های سیتوزولی در نوتروفیل ها را تشکیل میدهد. خاصیت باکتری کشی و قارچ کشی دارد و در هنگام عفونت و التهاب ۵ تا ۴۰ برابر افزایش مییابد.

غلظت کلپروتکتین در نمونه های مدفوع ۶ برابر بیشتر از پلاسمای خون است. بنابراین به عنوان یک نشانگر غیر تهاجمی قابل اعتماد برای بیماری های التهابی روده مانند کولیت اولسراتیو و بیماری کرون عمل میکند.

افزایش مقادیر کلپروتکتین شاخصی برای موارد زیر است:

بیماری التهابی حاد و مزمن روده (IBD)
تمایز بین بیماری التهابی فعال روده و سندرم روده تحریک پذیر (IBS)
پایش بیماری کرون و کولیت اولسراتیو

اساس آزمایش کلپروتکتین Calprotectin

کیت الایزا کالپروتکتین پیشتاز طب بر اساس اصل Sandwich ELISA برای اندازه گیری کمی مقدار کلپروتکتین در نمونه مدفوع در نظر گرفته شده است. به منظور انجام آزمایش کلپروتکتین، با استفاده از بافر مخصوص کلپروتکتین موجود در نمونه مدفوع استخراج می شود، و میزان کلپروتکتین موجود در نمونه استخراج شده با روش الایزای ساندویچ اندازه گیری میشود.

نمونه های آزمایشی، استانداردها و آنتی بادی های تشخیصی که بیوتینیله هستند به چاهک های از قبل پوشش داده شده با آنتی بادی جذب اضافه شده و سپس با بافر شستشو شسته میشود.

HRP-Streptavidin اضافه میشود و هر کونژوگه غیر متصل با استفاده از Wash Buffer شسته میشود.

واکنش آنزیمی HRP با افزودن سوبسترای TMB شناسایی میشود. در نهایت، واکنش با یک محلول توقف اسیدی خاتمه مییابد.

رنگ ایجاد شده متناسب با مقدار Calprotectin در نمونه یا استاندارد است. غلظت کلپروتکتین انسانی مدفوع در نمونه های آزمایشی مستقیماً از این منحنی استاندارد تعیین میشود.

محتویات کیت

محتویات کیت	توضیح	۹۶ تستی
پلیت :	حاوی چاهکهای کوت شده با آنتی بادیهای اختصاصی ضد کلپروتکتین	۱ × ۹۶ Well
بافر استخراج نمونه مدفوع(Extraction Buffer) :	دو ویال حاوی بافر استخراج نمونه (آماده مصرف می باشد) .	۲×۱۰۰ ml
محلول رقیق کننده نمونه (Sample Diluent) :	یک ویال که حاوی بافر رقیق کننده نمونه استخراج شده است (آماده مصرف می باشد).	۱×۵۰ ml
محلول آنزیم کونژوگه (Enzyme Conj.) :	یک ویال حاوی محلول کونژوگه ;که با آنتی بادی ضد کلپروتکتین کنژوگه شده است(آماده مصرف میباشد).	۱×۱۲ m
مجموعه ای از استانداردها (Set standards):	شامل ۶ ویال استاندارد است که با غلظت های مختلف معادل صفر، ۲۵ ،۵۰ ،۲۰۰ ،۴۰۰ و ۶۰۰ میکروگرم کلپروتکتین در هر گرم مدفوع میباشد.	St. 6×۱ ml
نمونه های کنترل (پایین و بالا) :	دو ویال، که حاوی نمونه کنترل با غلظت مشخص هستند.	۲×۱ ml
محلول رنگزای یک مرحله ای (Substrate-Chromogen) :	یک ویال حاوی محلول سوبسترا-رنگزا	۱×۱۲ ml
محلول شستشو (Wash Solution):	یک ویال حاوی محلول شستشوی غلیظ با غلظت ۲۰X به به منظور تهیه محلول شستشوی آماده مصرف، مقدار مورد نیاز را با آب مقطر به نسبت ۲۰/۱ رقیق نمایید. (نگهداری ۲-۸ درجه سانتی گراد)	۱×۵۰ ml
محلول متوقف کننده(Stop Solution) :	یک ویال حاوی اسید کلریدریک (HCl) 1 نرمال .	۱×۱۲ ml

جدول ۱ – محتویات کیت الایزا کالپروتکتین پیشتاز طب (آزمایش کلپروتکتین Calprotectin)

شرایط نگهداری:

دمای نگهداری کیت ۲-۸ درجه سانتی گراد میباشد.
چاهکها را در کیسه مخصوص پلیت به همراه رطوبت گیر نگهداری نمایید.
مدت زمان پایداری محتویات کیت الایزا کالپروتکتین پیشتاز طب تا زمان انقضای نوشته شده بر روی هر یک از آن ها می باشد.
محلول شستشو که به نسبت ۲۰/۱ با آب مقطر رقیق شده باشد و آماده به مصرف گردیده است، به مدت یک هفته در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتیگراد قابل نگهداری و مصرف می باشد.

مراحل آزمایش و کار با کیت الایزا کالپروتکتین پیشتاز طب

جمع آوری و نگهداری نمونه:

مقدار کمی از نمونه مدفوع برای انجام آزمایش کلپروتکتین جمع آوری شود. نمونه مدفوع باید ظرف حداکثر ۴ روز مورد آزمایش کلپروتکتین قرار گیرد. در صورت نگهداری نمونه به مدت طولانی باید در دمای ۲۰- درجه سانتی گراد نگهداری شود.

قبل از انجام استخراج کلپروتکتین از نمونه مدفوع نمونه باید به دمای اتاق برسد و به خوبی هموژنیزه شود.

استخراج کلپروتکتین از نمونه مدفوع:

روش نمونه برداری وزنی
نمونه برداری تقریبی

روش نمونه برداری ورزنی:

استخراج کلپروتکتین از نمونه مدفوع با استفاده از روش نمونه برداری وزنی به شرح زیر است.

تنظیم ترازوی دیجیتال با قرار دادن یک لوله آزمایش درب پیچ دار خالی به همراه لوپ نمونه گیری یک بار مصرف درون آن
برداشت ۲۰ تا۴۰ میلیگرم از نمونه مدفوع هموژنیزه با استفاده از لوپ نمونه گیری به درون تیوب
قرار دادن لوپ آغشته به نمونه به درون تیوب و تعیین وزن نمونه
اضافه کردن بافر استخراج به نسبت ۱ به ۵۰ به نمونه
ورتکس محتویات تیوب به مدت ۳۰ ثانیه
مخلوط کردن محتویات تیوب به مدت ۳۰ دقیقه با استفاده از شیکر
سانتریفیوژ تیوب ها به مدت ۳۰ دقیقه در xg3000
انتقال محلول رویی به تیوب جدید (رسوب را دور بریزید)
نگهداری نمونه استخراج شده به مدت حداکثر ۵ روز در دمای ۲ تا ۸ درجه سانتیگراد و برای مدت طولانی در دمای ۲۰ -درجه سانتیگراد یا پایین تر

روش نمونه برداری تقریبی:

استخراج کلپروتکتین از نمونه مدفوع با استفاده از روش تقریبی به شرح زیر است.

اضافه کردن ۲ میلی لیتر بافر استخراج به درون هر تیوب
برداشت حدود ۴۰ میلی گرم از مدفوع به وسیله لوپ اسپیرال (لوپ اسپیرال را در ۵ نقطه مختلف از نمونه مدفوع تا عمق ۵ میلی متر فرو ببرید)
قرارگیری لوپ به داخل تیوب
ورتکس، به گونه ای که نمونه به طور کامل در بافر حل شود
نگهداشتن تیوب به مدت ۵ دقیقه به صورت ساکن
استفاده از محلول رویی به عنوان نمونه استخراج شده

مراحل آزمایش کلپروتکتین:

رقیق کردن نمونه های مدفوع استخراج شده به نسبت ۱ به ۵۰ با استفاده از بافر رقیق کننده
ریختن ۱۰۰ میکرولیتر از هر کدام از نمونه های استاندارد کنترل و نمونه رقیق شده درون هر چاهک
پوشاندن چاهک ها برچسب مخصوص پلیت و قرار دادن میکروپلیت ها بر روی شیکر به مدت ۳۰ دقیقه
خالی کردن محتویات چاهک ها و ۵ مرتبه شستن هر چاهک با محلول شست و شو (۳۰۰ میکرولیتر)
اضافه کردن ۱۰۰ میکرولیتر از محلول آنزیم کونژوگه به هر چاهک
پوشاندن چاهک ها با برچسب مخصوص و قرار دادن میکروپلیتها بر روی شیکر به مدت ۳۰ دقیقه
خالی کردن محتویات چاهکها و ۵ مرتبه شستن هر چاهک با محلول شست و شو (۳۰۰ میکرولیتر)
اضافه کردن ۱۰۰ میکرولیتر محلول رنگزا به هر چاهک
قرار دادن چاهک ها در تاریکی و دمای اتاق به مدت ۱۵ دقیقه
اضافه کردن ۱۰۰ میکرولیتر محلول متوقف کننده به هر چاهک(به منظور توقف واکنشهای آنزیمی)
استفاده از دستگاه الیزا ریدر با فیلتر nm450 به منظور سنجش جذب نوری

محدودیتهای آزمایش کلپروتکتین:

در صورت مثبت شدن کلپروتکتین در مدفوع به تنهایی دال بر تشخیص IBD نمیباشد و می بایست به علائم بالینی و تاریخچه بیمار نیز توجه گردد.
به منظور بررسی تغییر میزان کلپروتکتین مدفوع و پیگیری درمان بیماری میبایست از روش استخراج وزنی برای نمونه مدفوع استفاده شود.
فرم فعال و غیر فعال بیماری التهابی روده (IBD) در بیماران مبتلا دارای نوسان است به همین جهت ممکن است نتایج آزمایش کلپروتکتین دارای نوسان باشد.
در صورتی که خونریزی مجاری گوارشی بیشتر از ۱۰۰ میلی لیتر در روز باشد روی غلظت کلپروتکتین اثر میگذارد و غلظت آن را تا حدود g/μg 15 افزایش می دهد.
بیماریهایی مانند عفونت دستگاه گوارش و سرطان روده بزرگ می تواند غلظت کلپروتکتین را افزایش دهد.

جهت آزمایش کلپروتکتین Calprotectin استفاده از کیت الایزا کالپروتکتین پیشتاز طب توصیه می گردد.

تستا عرضه کننده انواع کیت های آزمایشگاهی و لوازم مصرفی آزمایشگاهی و کیت الایزا کالپروتکتین پیشتاز طب

منابع

Feldman M, et al., eds. Epidemiology, pathogenesis, and diagnosis of inflammatory bowel diseases. In: Sleisenger and Fordtran's Gastrointestinal and Liver Disease: Pathophysiology, Diagnosis, Management. 11th ed. Elsevier; 2021. https://www.clinicalkey.com. Accessed July 22, 2020.

Goldman L, et al., eds. Inflammatory bowel disease. In: Goldman-Cecil Medicine. 26th ed. Elsevier; 2020. https://www.clinicalkey.com. Accessed July 22, 2020.

The facts about inflammatory bowel diseases. Crohn's and Colitis Foundation. https://site.crohnscolitisfoundation.org/resources/facts-about-inflammatory.html. Accessed July 22, 2020.

Crohn's disease. National Institute of Diabetes and Digestive and Kidney Diseases. https://www.niddk.nih.gov/health-information/digestive-diseases/crohns-disease. Accessed July 22, 2020.

Screening for colorectal cancer: U.S. Preventive Services Task Force recommendation statement. JAMA. 2016; doi:10.1001/jama.2016.5989.

Kliegman RM. Inflammatory bowel diseases. In: Nelson Textbook of Pediatrics. 21st ed. Elsevier; 2020. https://www.clinicalkey.com. Accessed July 22, 2020.

Lichtenstein GR, et al. ACG clinical guideline: Management of Crohn's disease in adults. American Journal of Gastroenterology. 2018; doi:10.1038/ajg.2018.27.