دیسک های آنتی بیوتیک | تست آنتی بیوگرام

روش های استاندارد

روش های استاندارد شده بر اساس روش بائر-کربی است. طبقه بندی مقاوم، متوسط ​​و حساس فقط یک میلی متر متفاوت است که در خطای آزمایشگاهی طبیعی است. برخی از کشت ها ممکن است یک منطقه مرزی ایجاد کنند که از روز به روز یا از آزمایشگاهی به آزمایشگاه دیگر متفاوت است. چنین فرهنگ هایی نسبتاً غیر معمول هستند.

 MEDIUM:  

محیط کشت استاندارد برای تست آنتی بیوگرام Mueller Hinton و Mueller Hinton II است که برای رشد بسیاری از موجودات هوازی در نظر گرفته شده است. برای ارگانیسم های سختگیر مانند استرپتوکوک ها و گونوکوک ها، باید ۵ درصد خون بدون نمک به مولر هینتون و مولر هینتون II اضافه شود. برای هموفیلوس در uenzae باید از محیط آزمایش هموفیلوس استفاده شود. صفحات آماده برای استفاده باید طبق دستورالعمل های برگه داده برای هر محیط آماده شوند.

S حساس:

این دسته نشان می دهد که جدایه ها با غلظت های معمول قابل دستیابی عامل ضد میکروبی وقتی که دوز توصیه شده در محل آلوده استفاده می شود، مهار می شوند.

 INTERMEDIATE I:  

این دسته شامل جدایه های ضد میکروبی است که MIC آنها نزدیک به سطح خون و بافت است و ممکن است نرخ پاسخ به آنها کمتر از ایزوله های حساس باشد. مقوله میانی به معنای کارایی بالینی در محل‌هایی از بدن است که داروها از نظر فیزیولوژیکی متمرکز شده‌اند (مانند کینولون‌ها و لاکتام‌ها در ادرار)، یا زمانی که می‌توان از دوز بالاتر از حد طبیعی دارو استفاده کرد.

مقاوم R :

این دسته به این معنی است که ایزوله‌ها با غلظت‌های معمولاً قابل دستیابی عامل با برنامه‌های دوز معمولی مهار نمی‌شوند و یا قطر ناحیه‌ای را نشان می‌دهند که در محدوده مکانیزم‌های خاص مقاوم میکروبی (مانند -لاکتام‌ها) قرار می‌گیرد. محتمل است و اثر بالینی عامل در برابر ایزوله به طور قابل اعتمادی در مطالعات درمانی نشان داده نشده است.

روش کار و مراحل آن:

۱- آماده سازی مواد:

طبق توصیه EUCAST، سوسپانسیون باکتریایی (تلقیح) با کدورت ۰.۵ مک فارلند را تهیه کنید.  ۴ یا ۵ کلونی که مورفولوژی مشابهی دارند از محیط جداسازی اولیه گرفته شده و در ۵-۴ میلی لیتر محیط براث معلق می شوند: مولر هینتون براث، تریپتیکازئین سویا براث (T.S.B.) یا انفوزیون قلب مغزی براث.

آنها در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد به مدت ۲-۵ ساعت انکوبه می شوند. در صورت وجود کدورت در پایان این زمان، کدورت را با یک لوله استاندارد مک فارلند ۰.۵ (معادل سوسپانسیون یکنواخت ۱.۵×۱۰۸ سلول باکتری در میلی لیتر) تنظیم کنید. اگر غلظت باکتری کم است، ۳ ساعت دیگر انکوباسیون را ادامه دهید و تنظیم کنید.

۲- تلقیح در پتری دیش:

سوسپانسیون باکتریایی آماده شده به طور همگن مخلوط شده و رگه ای می شود. ظرف ۱۵ دقیقه پس از تنظیم کدورت سوسپانسیون تلقیح، یک سواب پنبه ای استریل در سوسپانسیون تنظیم شده فرو کنید. سواب باید چندین بار چرخانده شود و روی دیواره های داخلی لوله بالاتر از سطح مایع فشار داده شود.

این کار باعث حذف تلقیح اضافی از سواب می شود و صفحه را به ظرف مولر هینتون پتری (یا آگار مناسب دیگر) تبدیل می کند.

سپس سوسپانسیون آماده شده را در تمام سطح صفحه کافی آگار تلقیح کنید. سطح آگار را باید در ۳ جهت مختلف با چرخاندن صفحه با زاویه ۶۰ درجه بین هر خط کشی سواب زد. اجازه دهید صفحات تلقیح شده خشک شوند (بیش از ۱۵ دقیقه) و درب آن را باز کنید.

 روش دیگر این است که چند میلی لیتر در آگار ریخته، به طور همگن پخش کنید و مقدار اضافی آن را حذف کنید. پس از تلقیح، قبل از استفاده از دیسک های آغشته به دارو، صفحات را به مدت ۱۰-۱۵ دقیقه بدون مهر و موم بگذارید تا رطوبت سطحی جذب شود.

۳- کاربرد دیسک آنتی بیوتیک:

اجازه دهید ظروف قبل از باز کردن به دمای اتاق برسند. کارتریج دیسک های آنتی بیوتیک را باز کنید و با استفاده از پنس استریل خنک شده دیسک را تخلیه کنید. دیسک ها را (حداکثر ۱۵ دقیقه پس از تلقیح پلیت ها) با استفاده از تکنیک آسپتیک اعمال کنید. دیسک را به آرامی داخل آگار فشار دهید.

فاصله بین دیسک ها نباید کمتر از ۲۴ میلی متر و فاصله تا لبه کمتر از ۱ سانتی متر باشد. حداکثر تعداد دیسک های اعمال شده بر روی صفحه ۹۰ میلی متری ۶ دیسک و در صفحه ۱۵۰ میلی متری – ۱۲ دیسک است.

به منظور برآورد مقاومت القایی استرپتوکوک ها و استافیلوکوک ها به کلیندامایسین، دیسک های اریترومایسین و کلیندامایسین باید در فاصله ۲۰-۱۲ میلی متری از لبه پتری دیش اعمال شوند. ترجیحاً دیسک‌های پنی‌سیلین و سفالوسپورین در فاصله کمتر از ۱۰ میلی‌متر از لبه پتری دیش قرار داده شوند و مرکز آنها حداقل ۳۰ میلی‌متر از هم فاصله داشته باشد.

با H. در uenzae، N. gonorrhoeae و S. pneumoniae، از ۹ دیسک در هر صفحه ۱۵۰ میلی متری یا چهار دیسک در صفحه ۱۰۰ میلی متری استفاده نکنید.

۴- انکوباسیون:

ظرف ۱۵ دقیقه ظروف را در انکوباتور قرار دهید و طبق توصیه های EUCAST )جدول زیر) در شرایط انکوباسیون قرار دهید. ظرف پتری را به طور معکوس در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد به مدت ۱۸ تا ۲۴ ساعت در انکوباتور قرار دهید. برای استافیلوکوکوس، آزمایش در دمای بالای ۳۵ درجه سانتیگراد ممکن است استافیلوکوکهای مقاوم به متی سیلین (MRS)  را تشخیص ندهد.

برای N. gonorrhoeae، در دمای ۱ ± ۳۶ درجه سانتیگراد انکوبه کنید. Haemophilus spp.، N. gonorrhoeae، S. pneumoniae و سایر استرپتوکوک ها باید در فضای غنی شده با ۵% CO2 انکوبه شوند.

۵- نتایج:

• قطر ناحیه مهار از قسمت زیرین دیسک خوانده می شود.
• اگر از مولر هینتون با خون استفاده شده باشد، مناطق بازدارنده باید از روی سطح با قطب نما یا خط کش خوانده شوند.
• مناطق به نزدیکترین میلی متر اندازه گیری می شوند.
• نواحی بازدارندگی باید طبق جدول ارائه شده ارزیابی شوند.
• بسته به نتایج، سویه های باکتری به عنوان SUSCEPTIBLE S، INTERMEDIATE I و RESISTANT R ارزیابی می شوند.
• مناطق بازداری اندازه گیری شده را با مراجعه به جداول منتشر شده (EUCAST، CLSI، ادبیات) تفسیر کنید.
• مناطق به نزدیکترین میلی متر اندازه گیری می شوند.
• اندازه گیری ممکن است توسط نرم افزار BioStrefa LITE ساده شود.