تشخیص مولکولی هیبریداسیون فلورسانس درجا (FISH)

تشخیص مولکولی

هیبریداسیون فلورسانس درجا (FISH)

این روش آزمایش مولکولی از پروب های فلورسنت برای ارزیابی ژن ها و/یا توالی DNA روی کروموزوم ها استفاده می کند.

انسانها به طور معمول دارای ۲۳ جفت کروموزوم هستند: ۲۲ جفت کروموزوم تعیین کننده جنسیت (اتوزوم) و ۱ جفت کروموزوم جنسی (XX برای زنان و XY برای مردان). کروموزوم ها از DNA تشکیل شده اند و توالی های چهار پایه را تکرار می کنند که هزاران ژن را تشکیل می دهند که تولید پروتئین را در بدن هدایت می کند و ویژگی های فیزیکی ما را تعیین می کند.

DNA شامل دو رشته است که در یک ساختار مارپیچ دوگانه (مانند یک راه پله مارپیچ) به هم متصل شده اند. هر نیم مارپیچ مکمل دیگری است.

برای آزمایش FISH ، نمونه ای از سلول های یک فرد حاوی DNA روی یک اسلاید شیشه ای ثابت می شود. بسته به علائم بالینی ، نمونه ها می توانند شامل خون ، مغز استخوان ، مایع آمنیوتیک یا سلول های توموری باشند. اسلایدهای دارای DNA “هدف” (شخص) گرم می شوند تا دو رشته DNA را به یک رشته جدا کنند.

سپس پروب های فلورسنت به نمونه اضافه می شوند. کاوشگرهای فلورسنت بخشهایی از DNA تک رشته ای هستند که مکمل قسمتهای خاصی از DNA مورد نظر هستند. این کاوشگر که دارای رنگ فلورسنت است ، به قطعه خاصی از DNA متصل می شود.

هنگامی که اسلایدها با استفاده از میکروسکوپ مخصوص مورد بررسی قرار می گیرند ، ژن های منطبق با کاوشگر را می توان به عنوان مناطق فلورسانس در نظر گرفت که به صورت نقاط روشن در پس زمینه تیره ظاهر می شوند.

تشخیص مولکولی – هیبریداسیون فلورسانس درجا (FISH)

هیبریداسیون فلورسانس درجا (FISH)

از این تکنیک می توان برای نشان دادن وجود کپی های اضافی ژن (ژن های کپی شده یا تقویت شده) و توالی های ژنتیکی مفقود شده (حذف ژن ها) یا جابجا شده (ژن های منتقل شده) استفاده کرد. افزایش تعداد کروموزومها ، همانطور که در برخی از اختلالات ژنتیکی دیده می شود ، با استفاده از فناوری FISH (به عنوان مثال تریزومی ۲۱ یا سندرم داون) تشخیص داده می شود.

ناحیه یا توالی های موردنظر DNA توسط کاوشگرهای مورد استفاده تعیین می شود. مناطق مورد نظر متعدد در DNA را می توان همزمان با استفاده از کاوشگرهای FISH با برچسب تعدادی از رنگهای مختلف فلورسنت ارزیابی کرد.

موارد زیر تنها چند نمونه از شرایطی هستند که ممکن است با استفاده از تکنیک FISH ارزیابی شوند.

تشخیص مولکولی هیبریداسیون فلورسانس درجا (FISH) چگونه به ما کمک می کند؟

تکنیک هیبریداسیون فلورسانس درجا (FISH) قانع کننده ترین شیوه برای مکان یابی توالی های خاص DNA و تشخیص موارد زیر تعیین کننده است:

• بیماری های ژنتیکی.
• نقشه برداری ژن.
• شناسایی انکوژن های جدید.
• شناسایی آبراتاسیون های ژنتیکی کمک کننده به انواع مختلف سرطان ها.

سندرم داون

برای این ارزیابی ، آزمایش FISH روی سلولهای مایع آمنیوتیک که از یک زن باردار حامل نوزاد مشکوک به سندرم داون (تریزومی ۲۱) بدست آمده است ، استفاده می شود. سه نسخه از کروموزوم ۲۱ ، در صورت وجود ، به عنوان سیگنال قرمز با استفاده از میکروسکوپ مشاهده می شود. سیگنال های سبز (دو نسخه) مربوط به کروموزوم ۱۳ است.

اینها برای کنترل است و نشان می دهد که آزمایش به درستی کار می کند. FISH از تشخیص بالینی تریزومی ۲۱ پشتیبانی می کند. پزشکان و مشاوران ژنتیک با زن کار می کنند تا به او در درک نتایج آزمایش کمک کند.

سرطان پستان

FISH برای ارزیابی سلول های تومور سینه از نظر وجود ژن تقویت شده ، HER-2 (سیگنال های قرمز) استفاده می شود. تقریباً در ۲۵ درصد از سرطان های سینه ، HER-2 تقویت می شود. زنان مبتلا به تومورهای تقویت شده HER-2 با دارویی که پروتئین محصول ژن غیر طبیعی را هدف قرار می دهد تحت درمان قرار می گیرند.

اگر یک زن برای تقویت HER-2 مثبت نباشد ، به احتمال زیاد از درمان هدفمند هیچ مزایای درمانی دریافت نخواهد کرد و سایر داروها در نظر گرفته می شوند.

سرطان خون

FISH در نوع خاصی از لوسمی مزمن ، لوسمی میلوژنی مزمن (CML) استفاده می شود. پروب های خاص مورد استفاده در این مورد BCR-ABL را تشخیص می دهند ، یک توالی ژنی غیرطبیعی که با انتقال بخشی از کروموزوم ۲۲ (BCR ، یک کاوشگر سبز) با بخشی از کروموزوم ۹ (ABL1 ، یک کاوشگر قرمز) تشکیل شده است.

نواحی فلورسانس زرد نشان دهنده ژن همجوشی غیر طبیعی (اتصال پروب های قرمز و سبز) است. یافتن همجوشی BCR-ABL تشخیص CML را تأیید می کند. بیماران مثبت BCR-ABL از داروهای هدفمند مولکولی مانند ایماتینیب سود می برند.

تشخیص مولکولی هیبریداسیون فلورسانس درجا (FISH)

کیت های مرتبط با DNA که در سایت تستا معرفی شده است:

کیت Anti Ds DNA آئسکو | لوپوس اریتماتوز سیستمیک SLE

از آزمایش Anti Ds DNA به عنوان معیار تشخیص بیماری لوپوس اریتماتوز سیستمیک SLE استفاده می شود.

کیت Anti Ds DNA ایده آل | آنتی بادی ضد DNA دو رشته ای

آنتی بادی ضد DNA دو رشته ای در تشخیص هپاتیت SLE و خودایمنی (لوپوید) کاربرد دارد.

تست دئوکسی ریبونوکلئاز DNase | محیط کشت DNAse Agar کندالب

تعیین توانایی هیدرولیز DNA با استفاده از تست دئوکسی ریبونوکلئاز DNase قابل اندازه گیری است.

مقاله مرتبط با

فلورسانس در هیبریداسیون فلورسانس درجا (FISH) و کاربردهای آن – PMC (nih.gov)