الایزا
کیت های بیوشیمی
کیت های مولکولی و سایر
کیت های دامپزشکی
کیت های زیبایی
تجهیزات آزمایشگاهی
کیت های تشخیص سریع
مصرفی
کیت ویتامین C | تست اسید اسکوربیک | آزمایش ویتامین ث
980,000 ریال
برای اندازه گیری و آزمایش ویتامین ث در سرم، پلاسما، انواع بافت و … از تست اسید اسکوربیک استفاده می گردد.
تستا عرضه کننده کیت ویتامین C با برند کیازیست.
معرفی کیت ویتامین C (تست اسید اسکوربیک)
Fibrinogen kit
فروش و قیمت کیت آزمایش ویتامین ث
کاربرد: برای تشخیص و تعیین کمیت فعالیت اسید اسکوربیک در سرم، پلاسما، بافت حیوانی/گیاهی و سایر مایعات بیولوژیکی به روش کالریمتری با بافر لیزکننده ویژه.
تستا عرضه کننده کیت های آزمایشگاهی و کیت های تشخیص سریع و انواع کیت الایزا
برند: کیازیست
محتویات: Vitamin C Standard(پودر)، Oxidizing Agent، Lysis Buffer، Develop Agent، Chromogen، ۹۶-well Photometric ،Plate، Protocol Booklet
قیمت : ۹۸۰۰۰۰ تومان
شرکت توسعه سلامت توان آفرین (تستا)، کیت ویتامین C را معرفی و عرضه می نماید.
برای خرید کیت تست اسید اسکوربیک در تستا شاپ ثبت سفارش نمایید.
فهرست مطالب
ویتامین C چیست؟
ویتامین (C) اسید اسکوربیک، (VC) یک دی اسید با ساختار انول است که یک لاکتون هتروسیکلیک پنج عضوی را در ارگانیسم تشکیل می دهد.
برای اندازه گیری و آزمایش ویتامین ث از تست اسید اسکوربیک استفاده می گردد. به پیشنهاد کارشناسان تستا، کیت ویتامین C کیازیست گزینه مناسبی برای این آزمایش است.
VC، به عنوان یک کوفاکتور آنزیمی برای چندین آنزیم، به عنوان یک دهنده الکترون برای مونواکسیژناز و دی‌اکسیژناز استفاده می‌شود. گیاهان و بیشتر حیوانات VC را از گلوکز سنتز می کنند، اما انسان ها و پستانداران غیر انسانی ظرفیت بیوسنتزی VC را به دلیل از دست دادن یک جهش عملکردی در آنزیم بیوسنتزی L-mannose-1،۴- لاکتون اکسیداز از دست داده اند.
بارزترین فعالیت شیمیایی VC این است که Fe۳+ را به Fe۲+ کاهش می‌دهد، سپس جذب آهن را در روده تقویت می‌کند و باعث ذخیره و استفاده از آهن می‌شود. Fe۳+ بلا فاصله با احیای اسید آسکوربیک واکنش نشان می دهد و Fe۲+ را تشکیل می دهد، سپس Fe۲+ با فنانترولین واکنش می دهد و واکنش ایجاد رنگ رخ می دهد. محتوای ویتامین C در پلاسما را می توان تعیین کرد. مقدار OD را اندازه گیری کنید و محتوای VC را به طور غیر مستقیم محاسبه کنید.
منابع غذایی حاوی ویتامین C
اسید ال اسکوربیک، یک آنتی اکسیدان و پاک کننده رادیکال های آزاد بوده که همه جا در میوه ها و سبزیجاتی مانند مرکبات (پرتقال، لیمو، لیمو ترش، نارنگی و غیره)، خربزه، گوجه فرنگی، فلفل، کلم بروکلی و … یافت می شود.
. با توجه به نقش اساسی در رژیم غذایی انسان، اسید ال اسکوربیک (E300) و مشتقات نمک (E301-303) معمولاً به عنوان افزودنی های غذایی استفاده می شوند، با مزیت اضافی خواص آنتی اکسیدانی و افزایش دهنده طعم آنها. در صنعت نوشیدنی، اسید ال اسکوربیک را می توان برای جلوگیری از اکسیداسیون برخی از نوشیدنی ها اضافه کرد.
کیت ویتامین C کیا زیست
در کیت ویتامین C کیا زیست ابتدا اکسیده شده سپس با کروموژن مخصوص واکنش داده تا در طول موج ۵۳۰ نانومتر جذب داشته باشد. بافر لیز ویژه در کیت ویتامین C منجر به حفظ ویتامین C شده که برای ذخیره بلند مدت آن مناسب می باشد.
کاربرد کیت ویتامین C
برای تشخیص و تعیین کمیت فعالیت اسید اسکوربیک در سرم، پلاسما، بافت حیوانی/گیاهی و سایر مایعات بیولوژیکی به روش کالریمتری با بافر لیزکننده ویژه
موارد احتیاط و نکات ایمنی
- برخی از معرف های کیت حاوی مواد خطرناکی هستند. باید از لمس پوست و لباس خودداری شود.
- در صورت لمس در اثر بی احتیاطی فوراً با آب فراوان بشویید.
- کلیه نمونه ها و مواد زائد باید بر اساس قوانین مربوط به ایمنی زیستی آزمایشگاه تصفیه شوند.
- نمونه های تازه یا نمونه هایی که اخیراً به دست آمده اند برای جلوگیری از تخریب و غیر طبیعی شدن توصیه می شود که ممکن است منجر به نتایج اشتباه شود.
- قبل از آزمایش ویتامین ث، لطفا دستورالعمل ها را به دقت بخوانید.
- هنگام کار با کیت از دستکش و لباس کار استفاده نمایید.
اطلاعات کلی و محتویات
شرایط نگهداری و جابه جایی: کیت ویتامین C کیا زیست در دمای ۴ درجه سانتی گراد نگهداری شود. حمل توسط یخ مرطوب انجام می شود.
- محدوده دینامیک: ۵-۴۰ g/mLµ
- حساسیت: g/mLµ ۲
نوع نمونه
مایع رویی کشت سلولی، ادرار، سرم، پلاسما، عصاره های کشت سلولی، سایر مایعات بیولوژیکی، عصاره های بافتی، محیط کشت سلولی
مقدار نمونه پیشنهادی
نمونه | حداکثر | مطلوب |
Cells | ۱.۵×۱۰۶ | ۵×۱۰۵ –۱×۱۰۶ |
Tissue | ۱۰۰ mg | ۵۰ mg |
Plasma or Serum | ۲۰۰ uL | ۲۰۰ Ul |
Plant | ۵۰۰ mg | ۵۰-۵۰۰ mg |
محتویات کیت ویتامین C کیا زیست
شماره | ماده | مفدار/ تعداد |
۱ | Oxidizing Agent | ۱.۵ میلی لیتر |
۲ | Lysis Buffer | ۵۰ میلی لیتر |
۳ | Develop Agent | ۱۰ میلی لیتر |
۴ | Chromogen | ۲ میلی لیتر |
۵ | Vitamin C Standard | پودر |
۶ | ۹۶-well Photometric Plate | ۱ Pcs |
۷ | Protocol Booklet | ۱ Pcs |
موارد لازم که در کیت ویتامین C موجود نیست:
- سرسمپلر و سمپلر در اندازه های مختلف
- میکروتیوب ۱.۵ میلی لیتری
- سولفوریک اسید (Sulfuric Acid)
- آب دیونیزه یا مقطر
- فور یا بن ماری با دمای ۳۷ °C
- شیکر (Shaker)
- سانتریفیوژ دوربالا (۱۵۰۰۰)۱۵۰۰۰×g
- دستگاه Plate Reader با طول موج ۵۳۰-۵۰۰ نانومتر
- کیت اندازه گیری پروتئین برای نرمال سازی (انتخابی) – KBCA96 Kiazist
- قبل از انجام تست کل پروتکل را بخوانید
آماده سازی نمونه
نمونه ها باید به روش های مرسوم تهیه شوند:
الزامات نمونه
نمونه ها نباید حاوی DTT، ۲- مرکاپتواتانول و سایر معرف های احیا کننده باشند. HEDP، EDTA و سایر عوامل کیلیت نباید اضافه شوند.
آماده سازی نمونه سلول و بافت (حیوانی و گیاهی)
سلول: از Lysis Buffer به میزان ۱ میلی لیتر روی سلول ها ریخته سپس آنها را با اسکراپر بتراشید.
بافت حیوانی: ۱۰۰ میلی گرم از بافت حیوانی را در ۵۰۰ میکرولیتر از Lysis Buffer کاملا هموژن کنید.
بافت گیاهی: ۳۰۰ میلی گرم از بافت گیاهی را در ۵۰۰ میکرولیتر از Lysis Buffer کاملا هموژن کنید.
در ادامه به مدت ۱۰ دقیقه در ۱۵۰۰۰×G سانتریفیوژ کرده و سوپرناتانت را جمع آموری کنید. سپس در ۴۰۰ میکرولیتر از آن را به یک میکروتیوب جدید انتقال داده و به آن ۲۰ میکرولیتر سولفوریک اسید غلیظ اضافه کرده و خوب مخلوط کنید. سپس به مدت ۱۰ دقیقه در ۱۵۰۰۰×G سانتریفیوژ کرده و سوپرناتانت را جمع آموری کنید. در این مرحله می توانید آن را در دمای -۲۰ °C ذخیره کرده و یا مستقیم به مرحله آزمایش ببرید.
آماده سازی مایعات بیولوژیک (سرم، پلاسما و …….)
ابتدا ۱۰۰ میکرولیتر از نمونه را با ۱۰۰ میکرولیتر Lysis Buffer ترکیب کنید. در ادامه به آن ۲۰ میکرولیتر سولفوریک اسید غلیظ اضافه کرده و خوب مخلوط کنید. سپس به مدت ۱۰ دقیقه در ۱۵۰۰۰×G سانتریفیوژ کرده و سوپرناتانت را جمع آموری کنید. در این مرحله می توانید آن را در دمای -۲۰ °Cذخیره کرده و یا مستقیم به مرحله آزمایش ببرید.
آماده سازی کیت و استاندارد
- پس از آماده سازی نمونه موارد زیر را آماده کنید.
- همه محلول ها در دمای اتاق گرم شوند.
- تمامی تیوب ها اسپین شوند تا محتویات به ته ویال ها جمع شود.
- تمامی محلول ها آماده به مصرف می باشند.
- Develop Agent: این محلول به طور طبیعی رسوب می کند. قبل از استفاده تکان دهید. نیاز به حل شدن ندارد.
- اسید سولفوریک ۸۵%: ۸.۵ میلی لیتر از اسید سولفوریک غلیظ را با ۱.۵میلی لیتر آب دیونیزه مخلوط کنید.
- آماده سازی استاندارد: به ویال استاندارد یک میلی لیتر از Lysis Buffer اضافه کرده و طبق جدول زیر استانداردها را بسازید. این ویال تا ۱ ماه در دمای -۲۰ ˚C قابل نگهداری می باشد.
شماره استاندارد | Lysis Buffer (µ) | استاندارد استوک (µ) | غلظت نهایی µg/mL |
A | ۱۰۰۰ | ۰ | ۰ |
B | ۹۹۵ | ۵ | ۵ |
C | ۹۹۰ | ۱۰ | ۱۰ |
D | ۹۸۰ | ۲۰ | ۲۰ |
E | ۹۶۰ | ۴۰ | ۴۰ |
نحوه انجام آزمایش ویتامین ث
جهت دقت آزمایش ویتامین ث و محاسبه Technical Replication توصیه می شود هر نمونه و یا استاندارد به صورت دوتایی انجام شود. نمونه ها در طول آزمایش بر روی یخ نگهداری شوند.
در یک تیوب جدید ۲۰۰ میکرولیتر از نمونه آماده شده و استانداردها را با ۱۲ میکرولیتر از Oxidizing Agent ترکیب کرده و در دمای اتاق به مدت ۵ دقیقه انکوبه کنید
در ادامه ۷۰ میکرولیتر از Develop Agent را با آن ترکیب کرده و خوب هم بزنید. سپس به مدت یک دقیقه در ۱۵۰۰۰×g سانتریفیوژ کنید
سپس ۱۳۰ میکرولیتر از سوپرناتانت را برداشته و به پلیت ۹۶ خانه اضافه کنید.
در ادامه به هر چاهک ۲۰ میکرولیتر Chromogen اضافه کرده و پلیت را به آرامی تکان داده تا مخلوط شود. سپس روی پلیت را پوشانده و در دمای ۳۷ درجه سانتیگراد به مدت ۴ تا ۵ ساعت انکوبه کنید.
در پایان این زمان، به هر چاهک ۱۰۰ میکرولیتر اسید سولفوریک ۸۵% اضافه کرده و به مدت ۵دقیقه بر روی شیکر قرار دهید تا دانه های قرمز در هر چاهک حل شود.
در آخر جذب پلیت را در طیف ۵۰۰ تا ۵۴۰ نانومتر خوانش کنید.
نحوه محاسبه
ابتدا از چاهک های دوتایی میانگین بگیرید.
سپس جذب همه چاهک ها را از جذب استاندارد صفر (A) کم کنید.
در ادامه توسط جذب استانداردها منحنی استاندارد در برابر غلظت استانداردها را رسم کنید. (نرم افزار Excelیا Curve Expert).
سپس بر طبق فرمول زیر غلظت منحنی را حساب کنید:
Ascorbic Acid Concentration (µg/mL) = C × D × ۲
C= غلظت محاسبه شده نمونه از روی منحنی استاندارد.
D= ضریب رقت نمونه.
۲= ضریب رقت که فقط برای مایعات بیولوژیک اعمال می شود.
برای محاسبه خودکار از نرم افزار Curve expertنسخه Basic نیز می توانید محاسبه را انجام دهید.
نمونه استاندارد و تست
عیب یابی
مشکل | راه حل | دلیل |
آزمایش کار نمیکنه! | به بخش آماده سازی کیت ویتامین C رجوع گردد | بافرها در دمای نامناسب می باشند |
پروتکل مصرف را مجدد مطالعه نمایید | مرحله ای از پروتکل جا افتاده است | |
طول موج توصیه شده در پلیت را بخوانید | طول موج اشتباه | |
نتایج غیر قابل انتظار | طول موج توصیه شده در پلیت را بخوانید | طول موج اشتباه |
برای حذف پروتئین حتما از H2SO4 استفاده گردد | نمونه دارای ذرات نامحلول | |
یا نمونه را رقیق نموده و یا با تهیه نمونه غلیظ انجام بدهید | جذب نمونه ها از خارج از طیف استاندارد می باشد | |
استاندارد خطی نیست | اطمینان از به دما رسیدن و یکدست شده مواد ( بافر ماسک گرم شود) | محتویات کیت به طور کامل به دمای ذکر شده نرسیده اند |
از کالیبره بودن و دقت سمپلر ها مطمئن گردید | خطای پیپت کردن | |
بعلت پی پتاژ کردن زیاد این اتفاق رخ می دهد | وجود حباب در چاهک ها |
جهت آزمایش ویتامین ث، استفاده از کیت ویتامین C با برند کیازیست توصیه می گردد.
تستا عرضه کننده انواع کیت های آزمایشگاهی و لوازم مصرفی آزمایشگاهی و تست اسید اسکوربیک
- Loewus F A. Biosynthesis and metabolism of ascorbic acid in plants and of analogs of ascorbic acid in fungi. Phytochemistry, 1999, 52: 193–۲۱۰. Vitamin C: Its Functions and Biochemistry in Animals and Plants - Google Books
- Rumsey S C, Levine M. Absorption, transport, and disposition of ascorbic acid in humans. Journal of Nutritional Biochemistry, 1998, 9(3): 116–۱۳۰. Encyclopedia of Dairy Sciences - Google Books
- Loewus F A, Loewus M W, Seib P A. Biosynthesis and metabolism of ascorbic acid in plants. Critical Reviews in Plant Sciences, 1987, 5(1): 101- 119.
- Du J, Cullen J J, Buettner G R. Ascorbic acid: chemistry, biology and the treatment of cancer. Biochimica et Biophysica Acta, 2012, 1826(2): 443-457.
- Smirnoff N. Ascorbic acid metabolism and functions: A comparison of plants and mammals. Free Radical Biology & Medicine, 2018.
- Vitamin C Standard(پودر)، Oxidizing Agent، Lysis Buffer، Develop Agent، Chromogen، ۹۶-well Photometric ،Plate، Protocol Booklet
دیدگاهها
هیچ دیدگاهی برای این محصول نوشته نشده است.